分子相互作用試験：ChIP染色質免疫共沈殿

一、技術概要

ChIP（染色質免疫共沈殿）は蛋白質とDNAの相互作用を研究する重要な技術であり、転写因子結合部位の鑑定、見掛け遺伝修飾分析などの分野に広く応用されている。

二、技術原理

抗原抗体の特異的結合を利用して、目的のタンパク質と結合したDNA断片を沈殿させ、DNA配列に結合したコントロールタンパク質をリアルに反映することができる。

三、応用シーン

1.転写制御研究：転写因子の同定（例えばp 53、NF−κB）のDNA結合部位。

2.見かけ遺伝学：分析グループタンパク質修飾（例えばH 3 K 27 me 3）遺伝子沈黙における作用。

3.疾患機序：癌中の異常蛋白（例えばMYC）のゲノム結合パターンを探索する。

4.可与qpcr、seqなどの技術を併用する。

四、技術優勢

ChIPはホルムアルデヒド架橋により細胞内の真の状態における蛋白質とDNAの動的結合を捕獲し、体外実験の偽陰性または偽陽性を回避し、特に転写因子などの一時的な結合事件の研究に適している。そして特異的抗体はまた標的タンパク質結合DNA断片を正確に濃縮し、qPCRまたは配列決定（ChIP-seq）を結合して低〜千細胞レベルの検出（最適化キットなど）を実現し、感度が顕著であるを選択し、幅広い適用性を備えています。

五、サンプルタイプ

新鮮細胞（壁貼り細胞／懸濁細胞）、凍結保存細胞、凍結保存組織、架橋後の細胞サンプル。

六、サンプル需要

細胞サンプル：約1×10 ^ 7個（10 cm皿1個、または懸濁細胞の形で遠心管に保存するか、T 75本1個）、

凍結保存組織：約70 mg、

架橋細胞サンプル：1%ホルムアルデヒド架橋を用いて細胞を架橋処理した。

七、サンプル準備&輸送

生細胞サンプル：距離が近いものは皿/T 75本/遠心管内に養生された新鮮な細胞サンプルを常温宅配便（遅くとも翌日到着）で輸送することができ、本市内ではフラッシュまたは直接配達することができ、距離が遠いものは-80℃で凍結保存された細胞をドライアイス輸送することができる、

組織サンプル&架橋後細胞サンプル：-80℃凍結保存ドライアイス輸送。

八、提供する試薬

検査用ChIP級抗体。

九、実験周期

1～2週間（シーケンシングを含まない）

十、その他

後続検査でRT PCRを選択する場合、後続検査の位置を提供する必要がある。

ホルムアルデヒド架橋細胞の具体的な手順：①細胞皿に最終濃度1%のホルムアルデヒドを添加し、37℃で10分間インキュベートする、②細胞を、［1 mM PMSF、1μg/mlペプチダーゼ、1μg/ml pepstatin A］を含む冷たいDPBSを用いて2回洗浄した。③細胞をプロテアーゼ阻害剤を含む2 mlの冷たいDPBSに掻き入れ、遠心管に移し、凍結保存して送る。