分子実験分子相互作用：Pull-downプルダウン実験

ネゴシエーション可能更新05/06

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概要

Pull-down実験は、引下げ実験とも呼ばれ、体外親和精製技術である

製品詳細

一、技術概要

Pull-down実験、引下げ実験とも呼ばれ、体外親和精製技術である。

二、技術原理

タンパク質をマトリックスに固定する（例えば、アガロースゲル）を含むが、細胞抽出液がこのマトリックスを通過すると、この固定タンパク質と相互作用するリガンドタンパク質が吸着され、吸着されていない「不純物」は溶離液とともに流出する。吸着されたタンパク質は、溶離液または溶出条件を変えることによって回収することができる。

分子实验分子互作：Pull-down下拉实验

三、応用シーン

1.既知タンパク質相互作用の検証：既知の餌タンパク質と相互作用する可能性のある獲物タンパク質をPull-down実験により、獲物タンパク質の存在を検出できれば、両者の相互作用関係を検証することができる。

2.未知タンパク質相互作用のスクリーニング：餌タンパク質と細胞分解液または他のタンパク質混合物をPull-down実験を行い、その後結合したタンパク質を鑑定し、餌タンパク質と相互作用する未知タンパク質をスクリーニングすることができる。

3.蛋白質複合体の組成を研究する：Pull-down実験により蛋白質複合体を分離し、それから複合体中の蛋白質を鑑定し、蛋白質複合体の組成成分を確定することができる。

4.タンパク質と核酸の相互作用を研究する：DNA Pull-downとRNA Pull-down技術を利用して、転写因子とプロモーターの結合、RNA結合タンパク質とRNAの結合などのタンパク質とDNA、RNAの相互作用を研究することができる。

四、技術優勢

目的のタンパク質と検出タンパク質が直接相互作用を起こすことができるかどうかを決定することができる。

五、サンプルタイプ

新鮮細胞（壁貼り細胞／懸濁細胞）、凍結保存細胞、凍結保存組織、溶解液サンプル。

六、サンプル需要

細胞サンプル：約5×10 ^ 6個（6 cm皿2個、または懸濁細胞の形で遠心管に保存するか、T 25本2個）、

凍結保存組織：約40 mg、

溶解液サンプル：蛋白濃度は2 mg/mg以上、蛋白総量は3 mg以上。

七、サンプル準備&輸送

生細胞サンプル：距離が近いものは新鮮なサンプルを提供することができ、皿/T 25本/遠心管内に培養された新鮮な細胞サンプルを常温速達（遅くとも翌日到着）で輸送することができ、本市内ではフラッシュまたは直接配達することができ、距離が遠いものは、-80℃で凍結保存された細胞をドライアイス輸送することができる、

組織サンプル&溶解液サンプル：-80℃凍結保存ドライアイス輸送。

八、提供する試薬

WB検査を行うには、対応する抗体を提供する必要があります。

九、実験周期

3～4週間（質量分析を含まない）

十、その他

RNA-Pull-down、DNA-Pull-down、GST-Pull-down，具体的には、種属及び標的タンパク質を告知し、Western blot/タンパク質スペクトルを後続的に測定し、融合タンパク質の体外発現費用は具体的な標的タンパク質に基づいて単独で評価して計算する必要がある。

の転写因子を用いて、一部の実験では組換え発現タンパク質を用いることもできる。

六、サンプル需要

細胞サンプル：約1×10 ^ 7個（10 cm皿1個、または懸濁細胞の形で遠心管に保存するか、T 75本1個）、

凍結保存組織：約400 mg、

植物組織：約2 g、細胞核蛋白、精製転写因子、組換え発現蛋白など：1枚の膜に少なくとも50 ulを提供し、濃度は0.5 mg/ml以上である。