分子相互作用試験：RIP（RNA免疫沈殿）

一、技術概要

RIP（RNA Immunoprecipitation、RNA免疫沈殿）技術は細胞内のRNAと蛋白質の相互作用を研究するための重要な実験方法であり、転写後の調節におけるRNA結合蛋白（RBP）の機能機序を明らかにすることができる。

二、技術原理

RIPは標的タンパク質に対する抗体を用いて対応するRNA−タンパク質複合体を沈殿させ、分離精製を通じて、複合体に結合したRNAに対してRT−PCR検証または配列決定分析を行い、結果はより生物学的説得力がある。

三、応用シーン

1.基礎機構：RNA結合タンパク質（例えばAGO 2、Polycomb複合体）の機能及びRNA制御ネットワークを解析する。

2.疾病研究：疾病と正常サンプル中のRNA-蛋白質の相互差異を比較し、潜在的なバイオマーカー（例えば癌関連lncRNA）を発見した。

3.薬物開発：RNA−タンパク質相互作用に対する薬物の影響を評価し、標的スクリーニングを加速する。

四、技術優勢

1.感度が高い：低存在度RNAと蛋白質の微弱な相互作用を検出することができる。

2.動的範囲が広い：少量の細胞（例えば5×10個）から複雑な組織サンプルまで適用できる。

3.多群学連用：RNA-Seq、CLIP-SeqまたはChIP-Seqを結合し、多次元制御ネットワークを構築する。

五、サンプルタイプ

新鮮細胞（壁貼り細胞／懸濁細胞）、凍結保存細胞、凍結保存組織、架橋後の細胞サンプル。

六、サンプル需要

細胞サンプル：約1×10 ^ 7個（10 cm皿1個、または懸濁細胞の形で遠心管に保存するか、T 75本1個）、

凍結保存組織：約70 mg、架橋細胞サンプル：1%ホルムアルデヒドを用いて細胞を架橋処理した。

七、サンプル準備&輸送

生細胞サンプル：距離が近いものは皿/T 75本/遠心管内に養生された新鮮な細胞サンプルを常温宅配便（遅くとも翌日到着）で輸送することができ、本市内ではフラッシュまたは直接配達することができ、距離が遠いものは-80℃で凍結保存された細胞をドライアイス輸送することができる、

組織サンプル&架橋後細胞サンプル：-80℃凍結保存ドライアイス輸送。

八、提供する試薬

検査用ChIP級抗体。

九、実験周期

1～2週間（シーケンシングを含まない）

十、その他

後続検査でRT PCRを選択する場合、後続検査の位置を提供する必要がある。

ホルムアルデヒド架橋細胞の具体的な手順：①細胞皿に最終濃度1%のホルムアルデヒドを添加し、37℃で10分間インキュベートする、②細胞を、［1 mM PMSF、1μg/mlペプチダーゼ、1μg/ml pepstatin A］を含む冷たいDPBSを用いて2回洗浄した。③細胞をプロテアーゼ阻害剤を含む2 mlの冷たいDPBSに掻き入れ、遠心管に移し、凍結保存して送る。