汎用TベクターコロニーPCR同定キットT 4原理ベクター

ノボライド汎用TベクターコロニーPCR同定キットT 4原理ベクター

汎用TベクターコロニーPCR同定キット

ディレクトリ番号：42015

キット組成、保管、安定性：

保存：-20℃で保存します。

具体的な製品のパラメータは製品説明書を受け取ったパラメータを基準とする

製品紹介：

コロニーPCR同定はTベクタークローン結合後に陽性クローン（挿入フラグメントを含む）の有無を同定する最も迅速な方法である。しかし、市販されているコロニーPCR同定キットはすべてT 3、T 7またはSP 6などの特異Tベクタープライマーを用いており、ある特定のTベクター結合陽性クローンの同定にしか使用できない。異なるT担体を使用する場合は、複数の鑑定キットを同時に購入する必要があり、使用コストが大幅に増加します。当社は汎用Tベクタープライマーを用いて開発した汎用TベクターコロニーPCR鑑定キットを用いて、1種類のキットを購入するだけで、市販のすべての一般的なTベクター（pGEM、pUC、pBluescriptシリーズを含む）接続陽性クローンの鑑定に使用することができる。また、T 3、T 7またはSP 6をプライマーとして用いたコロニーPCR同定キットプライマーは挿入部位からの距離が非常に短いため、100 bp前後またはそれ以下の断片の挿入を同定する際、陰性クローンのプライマー二量体ストライプと陽性クローン増幅ストライプの大きさが近く、区別できない。逆に偽陰性を引き起こす。本キットの汎用Tベクタープライマーは、フラグメントが挿入されていないときの距離が少なくとも150 bp以上あり、挿入フラグメントの長さを加えると、挿入フラグメントが増幅されたストリップなのかプライマーダイマーが増幅されたストリップなのかを明確に区別することができる。偽陽性または偽陰性を回避し、正確性を大幅に向上させた。当社が開発した携帯型PCR MasterMix予混合システムは、各成分を1つずつ加える必要はなく、単コロニーをスクリーニングする必要があり、1時間程度のPCR反応と電気泳動検査を経て組換えコロニーの鑑定結果を得ることができる。

予想される増幅フラグメント：

注意事項：

1. 組換えコロニーの鑑定時、単コロニーを採取する前に、まず標識をしっかりと行い、鑑定後の使用に便利である。

2. コロニーを採取する際には、PCR結果に影響を与えないように、単コロニーを選択しなければならない。

3.

操作手順（25米アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）システムの例として、お客様も20米アルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）システム）：

1. プライマーを含む1 x Taq MasterMix反応液を以下の系で配合した。

2.一晩培養した平板上のコロニーを番号付けした後、滅菌したガンヘッドを用いて単コロニーの一部を採取して上記反応液に加え、吹付け混和してコロニーを反応液中に十分に分散させた。

3.PCR管を熱循環器に設置し、以下の条件で反応を開始する。提案条件は以下の通り：

94℃30秒

55℃30秒30-33サイクル

72℃0.5-1分

72℃5分

注：挿入クリップのサイズに応じて延長時間を変更してください。予備変性時間は10分に延長され、主にコロニーを分解し、DNAテンプレートを放出するためである。

反応終了後、5-10を取る米l直接サンプル電気泳動検査。

注：細菌が分解しにくいか、不純物が多偽陰性の場合は、次の方法を試して、DNAを分解して放出した後に行う。

1. コロニーを採取して50に加える米ldd水（又は10米

2. 99度、10分間で菌液中の酵素を不活化し、DNAを放出した。

3. 12000 rpmで1分間遠心分離して細胞破片を除去した。

4. 上清PCR、25米l PCRシステムは5米l上清（開始50米ldd水）、または1米l上清（開始10米l dd水）テンプレートを作る。

汎用TベクターコロニーPCR同定キットT 4原理ベクター