TRzol（総RNA抽出試薬）（赤）

会社の製品は科学研究だけに使用され、臨床診断に使用されてはならない！

製品紹介：TRzol試薬は細胞または組織から総RNAを直接抽出する試薬である。細胞を破砕し溶解する際にRNAの完全性を維持することができます。クロロホルムを添加して遠心分離し、サンプルを水サンプル層と有機層に分けた。RNAは水様層に存在する。上の水サンプル層を収集した後、RNAはイソプロパノール沈殿により回収することができる。

ヒト、動物、植物、細菌組織にかかわらず、この方法は少量及び大量の組織と細胞に対して比較的に良い分離効果がある。すべての操作は1時間以内に完了できます。TRzol抽出した総RNAはDNAと蛋白質の汚染を避けることができる。したがって、RNAインプリント分析、斑点ハイブリダイゼーション、poly（A）+選択、invitro転写、RNA酵素保護分析、分子クローニングを行うことができる。

TRzol試薬は異なる種類の異なる分子量サイズの複数のRNAの析出を促進することができる。例えば、ラット肝臓から抽出されたRNAはアガロースゲル電気泳動により電気泳動し、臭化エチル錠で染色され、7 kbと15 kbの間に不連続な高分子量ストリップ（mRNAとhnRNA成分）が多く、2つの優位性リボソーム~ 5 kb（28 S）と~ 2 kb（18 S）、低分子量RNAは0.1と0.3 kbの間（tRNA、5 S）を介在することが分かった。抽出されたRNAをTEで希釈すると、そのA 260／A 280比は≧1.8となる。

製品貯蔵：TRzolは室温で12ヶ月間安定して保存できる。それでも、最適な効果を得るためには、2 ~ 8℃の環境下で保存することをお勧めします。

PCR反応にはどのような試薬と設備が必要ですか。

テンプレートDNA：PCR反応には、細胞、組織、血液からDNAを抽出するなどのテンプレートDNAが必要である、プライマー：PCR反応の2つのプライマーは、テンプレートDNAの両端とそれぞれ結合して増幅するために必要な特定の領域であり、プライマーはTAクローニングなどの過程で使用されたプライマーに合成することもできる、dNTPs：PCR反応には4種類のdNTPsが必要で、デオキシアデノシン酸（dATP）、デオキシチジン酸（dCTP）、デオキシグアニル酸（dGTP）、デオキシシトシン酸（dTP）を含み、細胞分裂、DNA合成などの生物学過程に用いられ、PCR増幅のためのテンプレートDNA鎖の伸長と増幅に用いられる、Taq DNAポリメラーゼ：PCR反応に必要なポリメラーゼ、一般的にTaqポリメラーゼを使用し、PFU、Phusionなどの他の種類のポリメラーゼがあり、DNA鎖の増幅に使用されている、PCR buffer溶液：PCR反応に対して緩衝作用があり、反応pHを調節し、チオ硫酸水素塩SDS、ホルムアルデヒドなどの小分子有機化合物は、PCR反応の特異性を強化し、それによって反応効率を高めることができる、酵素切断システム：PCR増幅はしばしば組換え、構築、配列決定などの実験ステップに関連し、しばしば酵素切断操作を行う必要がある。DNA精製キット：PCR反応生成物を精製するため、
デバイス：
PCR計：反応温度を制御し、PCR反応時の異なる温度段階の厳格な制御を保証するために使用する、電気泳動槽：PCR増幅産物を分離するため、核酸抽出装置：組織サンプルから全自動で核酸を抽出する。これらの試薬と設備はPCR分子生物学技術の中ですべて、秩序が整った上でこそ、PCR反応を行い、正確な結果を得ることができる。

PCRに関する基礎実験：

PCR反応の基本ステップ一般的なポリメラーゼ連鎖反応は20〜35サイクルで構成され、各サイクルは以下の3つのステップを含む：

一、

高温（93〜98℃）を用いて二本鎖DNAを分離した。高温は2つのDNA鎖を結ぶ水素結合を遮断する。最初のサイクルの前に、テンプレートとプライマーの分離を確実にするために、通常は長時間加熱され、単鎖の形だけで存在する。この工程時間は1〜2分であり、次にPCR計は温度を制御して循環段階に入る。

二、アニール又は接合、複素性：

DNA二重鎖分離後、温度を下げてプライマーを単鎖DNAに結合できるようにした。誤ったアニーリング温度は、プライマーがテンプレートと結合しないか、誤って結合する可能性がある。このステップ時間は1〜2分である。

三、延長：

DNAポリメラーゼは、冷却時に結合したプライマーからDNA鎖に沿って相補鎖を合成し始めた。この段階の温度はDNAポリメラーゼに依存する。この工程時間は、ポリメラーゼおよび合成を必要とするDNA断片の長さに依存する。従来のTaqは1000 bp/min、比較的新しいTbr（好熱菌Thermus brockianus由来）を約40秒、商業会社が生産した融合型ポリメラーゼを合成するのに約10-15秒しかかからないと推定している。

PCR反応条件の最適化：

1、変性温度と時間：

テンプレートDNA鎖分解の保証はPCR増幅全体の成功を保証する鍵である。温度が高すぎるか、高温の持続時間が長すぎると、Taq酵素活性とdNTP分子に損害を与えることができる。

2、復性温度と時間：

PCR増幅特異性は複素過程におけるプライマーとテンプレートの結合に依存する。複素性温度が高いほど、生成物特異性が高くなる。複素温度が低いほど、生成物特異性は低くなる。プライマーのTm値に応じて具体的に設定する必要があります。

3、延長温度と時間：

一般的にTaq酵素の最適作用温度70 ~ 75°Cの間に位置する。プライマーが16個のヌクレオチド未満の場合、高すぎる延伸温度はプライマーとテンプレートの結合に不利であり、70 ~ 75°Cまでゆっくりと昇温することができる。延伸反応時間は、増幅すべきフラグメントの長さによって決めることができ、1 kb未満、1 minで十分である、1 kbを超えると延長時間がかかります。Taq酵素は1 kb/minに基づいて時間を増加させることができる。ここでは、延長時間が長すぎると非特異的な増幅が生じる可能性があることに注意する必要がある。そのため、適切な延長時間を設定する必要があります。

他のパラメータを選択した後、PCR循環回数は主にテンプレートDNAの濃度に依存する。理論的には20〜25回の循環後、PCR生成物の蓄積は最大値に達することができ、実際の操作では1ステップ当たりの反応の収率が100%に達することは不可能であるため、テンプレート濃度がいくらであっても、20〜30回は比較的合理的な循環回数である。循環回数が多いほど、非特異的な増幅が増加する。

会社が販売している製品：

TRzol は（総 リボ核酸 試薬を抽出する）( 赤 )	Pandemic 2009 H 1 N 1インフルエンザウイルスHA遺伝子核酸検出キット	補酵素I NAD（H）含有量試験箱（比色法）
TRzol は（总 リボ核酸 試薬を抽出する）( 無色 )	季節性インフルエンザウイルスH 3 N 2サブタイプHA遺伝子核酸検出キット	ニコチンアミドアデニン二ヌクレオチドキナーゼ（NADK）試験箱（比色法）
TRzol LS は（液体サンプル リボ核酸 試薬を抽出する）	H 7 N 9サブウイルスHA遺伝子核酸検出キット	乳酸脱水素酵素（LDH）試験箱（比色法）
RNApure スーパピュアトータル リボ核酸 迅速抽出キット （DNase I）	H 7 N 9サブウイルスNA遺伝子核酸検出キット	NADリンゴ酸脱水素酵素（NADMDH）試験箱（比色法）
EASYspin 全血 リボ核酸 迅速抽出キット （DNase I）	B型インフルエンザウイルス核酸検出キット	NADPリンゴ酸脱水素酵素（NADPMDH）試験箱（比色法）
EASYspin 組織 / 細胞 リボ核酸 迅速抽出キット （DNase I）	B型インフルエンザウイルスYamagata系核酸検出キット	ミトコンドリア呼吸鎖複合体I/NADHコエンザイムQ還元酵素試験箱（比色法）
EASYspin 植物 リボ核酸 迅速抽出キット （DNase I）	B型インフルエンザウイルスVictoria系核酸検出キット	NADHオキシダーゼ（NOX）試験箱（比色法）
プランタイド 植物 リボ核酸	ウイルスH 7 N 9変異株（HPAI-H 7）核酸検出キット	クエン酸合成酵素（CS）試験箱（比色法）
ウイルスゲノム DNA/RNA 迅速抽出キット	季節性インフルエンザウイルスH 1 N 1サブタイプHA遺伝子核酸検出キット	エタノール含有量試験箱（比色法）
RNAclean RNA 清浄精製キット	プロピル型インフルエンザウイルス核酸検出キット	エタノール脱水素酵素（抗利尿ホルモン）試験箱（比色法）
RNA固定器 むえきたいちっそ リボ核酸 サンプルちょぞうえき	ユーラシア系鳥インフルエンザウイルス（EA-H 1 N 1）核酸検出キット	ホルムアルデヒド脱水素酵素（FDH）試験箱（比色法）
それは安全です。 効率的 リボヌクレアーゼ しょうかざい	新型インフルエンザウイルス/B型インフルエンザウイルス核酸検出キット	アセトアルデヒド脱水素酵素（ALDH）試験箱（比色法）
RNA長RNA ちょうきほぞんえき	H 7 N 9サブウイルス核酸検出キット/内標準含有	補酵素IINADP（H）がんりょうしけんばこ
RNase離脱 即使用型強力 リボヌクレアーゼ	季節性インフルエンザウイルスH 3 N 2サブタイプ核酸検出キット	NADPホスファターゼ（NADPase）試験箱（比色法）