RNAfixer無液体窒素RNAサンプル貯蔵液

商品の属性：

保存条件：

室温（18〜25℃）で1年以上保存し、使用時に沈殿または析出が認められた場合は、37℃水浴プラス熱再溶解後に使用し、再溶解後は製品品質に影響を与えない。
製品紹介：
RNAfixerは液体の無毒な組織保存液体であり、新鮮な組織細胞の細胞漿に迅速に浸透することができるにおいて、非凍結状態で細胞内のRNAをその場で安定化し保護する。組織シートを取り外した直後にRNAfixerに浸漬して保存することは、将来抽出されるRNAの品質と量に影響を与えない。RNAfixerがRNAサンプルを除去するにはすぐに処理する必要があるあるいは液体窒素の保存が必要な不便さ。37℃で1日保存し、25℃で1週間保存し、4℃で1ヶ月保存し、-20℃または-80℃で長期保存した。
RNAウイルスサンプル（HCVやHIVなど）は、37℃で1ヶ月間保存することができる。動物組織（心、肝臓、腎臓、筋肉、睾丸、脳、脾臓など）、培養細胞、RNAウイルス、果ハエ、細菌、白血球、いくつかの植物組織など。
製品特徴：
1.操作が容易：RNAfixerに浸漬することでRNAが分解されないように組織を適切な大きさにすることができる。
2.液体窒素不要：サンプルの保存に液体窒素、ドライアイスまたは−80℃冷蔵庫を必要とせず、特に臨床および野外サンプルに適しているの迅速かつ大規模な採集。
3.便利な輸送：処理したサンプルは25℃で1週間保存でき、サンプルの郵送と輸送を容易かつ安価にし、有利にする学術協力と交流。
4.複数回凍結融解：RNAfixer処理されたサンプルは複数回凍結融解を繰り返すことができ、その間にサンプルに対して各種処理を行うことができる。（1）：RNAfixer処理されたサンプルは複数回凍結融解することができる。（2）：（3）最終的に抽出されたRNAの品質には影響しません。
5.比較性が強い：RNAfixerは大規模サンプル処理における誤差を減少させ、各回の実験数間の比較性を増加させ、大規模遺伝子発現スペクトルの分析に特に有用である。
使用方法：
RNAfixerは新鮮な組織にのみ使用され、RNAfixerに浸漬する前に組織を凍結することは禁止されています。新しいものを迅速に新鮮な組織は成長し、幅があり、高さは任意の一辺の厚さ<0.5センチでRNAfixerに浸漬すればよい（一辺の厚さがあれば度は0.5 cmを超えず、RNAfixerは迅速に浸透することができ、他の2辺のサイズは重要ではありません）。新規グループを布地は5倍の体積のRNAfixerに浸漬し、指示に従って適切な温度に保管した。
1.動物組織RNAfixerは組織構造を破壊または溶解しないので、RNAfixerに浸漬して浸透を達成するバランスのとれた組織はRNAfixerから取り出し、より小さなブロックにカットしてRNAfixerに戻すことができます次回も使い続けます。マウスの肝、腎臓、脾臓などの小器官はせん断を必要とせず、RNAfixerに完全に保存することができる。
異なる組織サンプルのRNAstore使用量を推奨する：

2.植物組織の多くの植物組織は直接RNAfixerに浸漬すればよく、ある植物は天然浸透障壁、例えばワックス質がある保護層は、RNAfixerの浸透を容易にするために、まずワックス層を破壊する必要があります。
残留培養液を除去する。細胞を少量のPBS緩衝液に懸濁させた。体積RNAfixerを5～10倍添加し、混合する均等。
4.全血中白血球の保存には、白血球を赤血球と血清から分離し、グループ別に培養細胞を織るように処理すると、白血球はRNAfixerに効果的に保存される。全血、血漿をまたは血清中のRNAはRNAfixer中に保存され、それらの蛋白質含有量が高すぎるため、RNAfixerと混合した後不溶な沈殿物を形成しやすい。

細菌はRNAfixerでは成長しないが、RNAfixerは細菌を破壊せず、E.coliは4℃で1ヶ月はまだ完全なRNAを提出することができます。
RNAfixerにおけるサンプルの格納：
1.-80℃に保管するサンプル長期保存用。RNA fixer中のサンプルを4℃に一晩放置し、サンプルをすくい上げ、できるだけきれいなRNAfixer液体を除去し、−80℃に放置した。組織培養細胞については、除去する必要はないRNAfixer，-80℃で直接冷凍し、細胞を分解することはありません。RNAの完全性と収量に影響を与えずに再凍結することもできる。
2.-20℃に保管するRNAfixer中のサンプルを4℃で一晩放置し、次いで−20℃に移した。-20℃ではサンプルは氷ではありません凍結するが、将来のRNA抽出に影響を与えることはない結晶化が形成される可能性がある。サンプル使用時にルームで
3.4℃に保管サンプルは4℃で1ヶ月保管できます。
4.25℃に保管25℃に保存したサンプルのRNAは1週間以内に完全であり、2週間保存したサンプルのRNAはわずかに分解し、かろうじてnorthern analysisには使用できますが、nuclease protection assay or RT-PCRには十分な品質があります。
5.37℃に保管37℃のサンプルに保存されたRNAは24時間以内に完全に保たれ、3日間で部分的に分解された。RNAfixer保存サンプルのRNA抽出：サンプルをRNAfixerから取り出し、RNAfixerは直接池に注ぎ、水道水で流すことができ、不要
1.組織
きれいなピンセットでRNAfixerからサンプルを取り出し、吸水紙で残ったRNAfixerを少し吸い取った後、新鮮な組織と同様に液体窒素を研磨し、その後均質化処理の標準手順に従ってRNAを抽出することができる。
2.細胞
RNAfixerに保存されている細胞には2つの選択肢があります。1つはRNAfixerを除去してRNAを抽出し、もう1つは1つは細胞とRNAfixerの混合物から直接抽出することです。
1）RNAfixer除去後のRNA抽出RNAfixerに保存されている細胞はそれほど脆弱ではなく、割れずに高い遠心速度に耐えることができます私たちは5000 gの遠心分離で細胞の収集に成功した経験があり、各細胞の強度が異なるため、まず、使用する速度で遠心分離しても細胞を破壊しないように、重要ではない細胞を用いた予備試験を行った。別の選択選択は遠心分離前に等体積のPBSを加えてRNAfixerと細胞の混合物を希釈し、溶液の密度を減少させ、細胞溶液を沈殿させることができる。
2）RNAfixerを除去せずにRNAを直接抽出する
また、細胞やRNAfixerの混合物は、通常の手順で動作します。

ポリメラーゼ連鎖反応基本的な手順と注意事項？

一、実験原理

ポリメラーゼ連鎖反応インビトロ人工選択的増幅であるデオキシリボ核酸生物体内に似た方法ですデオキシリボ核酸のコピーを作成します。生物体内でデオキシリボ核酸コピーにはテンプレート、プライマー、デオキシリボ核酸ポリメラーゼ、デオキシリボ核酸分解酵素、デオキシヌクレオシド三リン酸;体外ポリメラーゼ連鎖反応反応には同様の成分が必要であり、テンプレート、プライマー、PCR緩衝液、タッカー酵素、デオキシヌクレオシド三リン酸。プライマーは人工的に設計された特定の配列であり、特定の位置への増幅を実現する。PCR緩衝液反応の緩衝環境を提供する、反応過程は生体内と同じで、デオキシリボ核酸二本鎖が開き、プライマーがテンプレートに結合し、延長して新しい鎖を形成する。これらの過程は生物体内ではデオキシリボ核酸分解酵素は鎖を分解し、体外では反応温度を制御することによって実現される。一般的な94℃へんせいテンプレートデオキシリボ核酸二本鎖を開き、アニール温度でプライマーをテンプレートに結合し、最後に72℃延長を完了し、この手順を繰り返して特定のフラグメントを実装するデオキシリボ核酸の大量増幅。第3サイクルが始まるまで射出と標的は生まれませんデオキシリボ核酸セクションが同じデオキシリボ核酸分子、さらに循環的に標的を生成するデオキシリボ核酸セグメントの指数が倍になる。

増幅後,生成物の蓄積による,指数関数的に増幅されていた反応を平坦な曲線にする,生成物は循環数とともに明らかに上昇しなくなった,これをプラットフォーム効果と呼ぶ。プラットフォーム期間（高原）ミスマッチによる低濃度非特異性生成物の大量増幅を継続し、高いレベルに達することができる。そのため、循環回数を適切に調節し、プラットフォーム期間前に反応を終了し、非特異性生成物を減少させるべきである。プラットフォーム到着期間（高原）必要なサイクル数は、サンプル中のテンプレートのコピーに依存します。

二、主な成分

1.テンプレートは、主にゲノムを含む様々な形態であってもよいデオキシリボ核酸、プラスミドデオキシリボ核酸、ウイルスを運ぶゲノムデオキシリボ核酸、ポリメラーゼ連鎖反応生成物、cDNAなどがありますが、リボ核酸。異なるタイプのテンプレートでは、プレトランスフォームの時間とテンプレートの量が主に異なります。一般的に大きなゲノムに対してデオキシリボ核酸よへんせいじかん10分十分、プラスミドDNA 2分、ウイルスを運ぶゲノムデオキシリボ核酸よへんせい2分間、ポリメラーゼ連鎖反応せいぶつよへんせい2分間をオフにします。

注意cDNAシングルチェーンデオキシリボ核酸が、それでもできますポリメラーゼ連鎖反応のテンプレートは、第1サイクルの時に1つのプライマーだけが結合し、別の鎖を合成するにすぎない。第2ラウンドから2つのプライマーが特異部位に結合し、従来のポリメラーゼ連鎖反応のジョイントレールです。同じ単鎖のリボ核酸却不能进行ポリメラーゼ連鎖反応拡大の原因は実現にあるポリメラーゼ連鎖反応反応したのはデオキシリボ核酸ポリメラーゼは、わざわざ識別することしかできませんデオキシリボ核酸チェーン。

2.テンプレートの量については、一般的に25ul体系デオキシリボ核酸的质量为50,100ナノグラム。ゲノムの場合デオキシリボ核酸その構造は比較的に複雑であるため、抽出の濃度も比較的に大きくなりがちで、濃度が大きすぎることを防止するためにポリメラーゼ連鎖反応影響を与えるため、抽出するデオキシリボ核酸勾配希釈を行う。濃度が高すぎると非特異的な増幅を引き起こす可能性があります。プラスミドおよびポリメラーゼ連鎖反応

会社が販売している製品：

ポリメラーゼ連鎖反応実験で注意すべき問題は何ですか。?

ないCT値

検出結果が検出されましたかCT値の状況,次の問題があるかどうかを調べる:

1(一般的に超えない45循環,背景値だけでなく,定量的にも正確ではない);

2、ポリメラーゼ連鎖反応プログラム設定エラー,蛍光信号を検出する手順が間違っている。一般的シンガポール法の採用72℃延長時に収集TaqMan,また蛍光採取の有無;

3、プライマーまたはプローブの分解。通過可能ページ電気泳動はプライマーとプローブが分解したかどうかを検出する;

4、テンプレート量が分解したり、サンプル量が不足したりする可能性があります(超えない500ng，キット説明書に従えばよい),未知濃度のサンプルについては、シリーズ希釈サンプルの最高濃度から始めなければならない;テンプレート分解が発生した場合,サンプル準備における不純物の導入及び凍結融解を繰り返す場合を考慮すべきである,テンプレートサンプルの準備の小量化を推奨,繰り返し凍結融解を避ける;

5、プライマープローブが適切か(特にプライマーは内包子を横切る,ゲノムの増幅を確実にするためにDNA；上下流プライマーサンショウウオ.値が超過しました4℃以上も増幅に影響します)。

CT値が遅すぎる

相対定量では，Ct値は一般的に1525間がいい,絶対定量では,低コピー数のサンプル，Ct値が大きくなります,でも普通は超えるべきではありません40循環,そうでないと定量的に正確ではありません。

したがって,判断CT値が遅すぎて正常でないかどうか,具体的な実験設計と目的に基づいて行う必要がある。

1、増幅効率が低い。プライマー間またはプライマーとプローブの割合が不適切である,最適化が必要;プライマーまたはプローブの設計が不合理である,再設計が必要;

2、ポリメラーゼ連鎖反応プログラムが合わない,三段階法に変えて反応する,又は最適化焼鈍/えんちょうおんど,アニール温度を適切に下げることができる;焼きなまし/延長時間が短い(推奨された時間条件で延長できます10秒）、

3、塩化マグネシウム濃度が不適切である,マグネシウムイオン濃度などを増加させる。ポリメラーゼ連鎖反応各種反応成分の分解又は添加量の不足;

4、ポリメラーゼ連鎖反応産物が長すぎる。ポリメラーゼ連鎖反応製品設計が500bp；

5、テンプレートに抑制物が存在する。高純度テンプレートで行うポリメラーゼ連鎖反応テンプレートを希釈するか、テストします。