赤カビsu-N-脱メチル酵素（ERND）活性測定キット説明書

びりょうほう 100トン/48秒

本測定前に必ず取る 2-3 個の予想差異の大きいサンプルを予測決定する測定意義：

シトクロムP 450 酵素は主に肝臓に存在する酵素系であり、外因物質代謝の中で、特に薬物と毒物の代謝は、重要な役割を果たす。ERND にシトクロムP 450 酵素系におけるCYP2B 亜型は、薬物代謝の脱メチル化と密接に関連している。CYP2B ある触媒基質は非活性で排泄しやすい代謝産物を形成して解毒作用を持ち、またある薬物をCYP 2 B代謝活性化。

測定原理：

ERND触媒赤カビスはホルムアルデヒドを放出し、Nash比色によるホルムアルデヒド含有量の測定により、算出することができる ERND活性。

赤カビsu-N-脱メチル酵素活性測定キットP 450シリーズ

構成：

試薬一：粉剤×1 ボトル、4℃で保存する。臨用前加100ml 蒸留水が溶解する。

試薬三：粉剤×1管、4℃で保存する。臨用前加蒸留水1 ml、よく溶解する。 ボトル、4℃で保存する。臨用前加0.5ミリリットル 蒸留水、よく溶かす。試薬五：粉剤×1 ボトル、4℃で保存する。使用直前に蒸留水を加える4.5 mlをよく溶かす。

標準液：液体×1 ℃で保存する。臨用前取1.5ml EP チューブ、追加 10μl標準液、添加 蒸留水990μl、混合すると0.05 mmol/L標準ジアアルデヒド溶液、4℃保存。

具体的な製品のパラメータは製品説明書を受け取ったパラメータを基準とする

自己準備機器と用品：

通常の遠心分離機、超速遠心分離機、可変式ピペット、可視分光光度計/酵素スケール、微量石英比色皿/96 オリフィスプレート、蒸留水と氷。

粗酵素液抽出：

1、約束する 0.5グラム 組織する 1ml 試薬一、氷の上で十分に研磨し、10 000g 4℃離心（こころ） 30min，上澄み液を取り、超速遠心管に移す。

2、粗微粒子：100,000 g、4℃、遠心分離60min，

3、ヘモグロビンなどの不純物を除去する：ステップへ 2 の沈殿に加えて 1ml試薬一、蓋を締めた後に十分に振動溶解し、100000g遠心 30min，

上清液

4、最終微粒子：ステップへ 3 の沈殿に試薬二を添加する 0.5ml，十分な振動溶解、すなわち粗酵素液、測定を待つ。この測定液は当日使用する必要がある。

測定操作：

1. 分光光度計/酵素スケール予熱 30分、波長を 412 nm，

2. 試薬2セット 37℃水浴中予熱30分。

3. 照合管理：取る 0.5ミリリットル EP チューブ、追加10μl 粗酵素液、170μl 試薬三、10μl 蒸留水、混合後に置く37℃水浴保温 30分;すぐに参加する 35μl試薬5、混合して氷浴中に置く 5min取出ポストイン 35μl試薬6、混合後の室温

静置（せいち） 5分;室温 8000回転/分遠心 5min；新しいEPを取るチューブ、追加 100μl 上清液、100μl 試薬七、混合後 60℃水浴10min，そして取り出して 5分、 412ナノメートル光吸収を測定し、Aペアで管理する。

4. 測定管：取る 0.5ミリリットル EP チューブ、追加10μl 粗酵素液、170μl 試薬二、10μl 試薬三、10μl 試薬四、混合後に置く37℃

水浴保温 30分;すぐに参加する 35μl試薬5、混合して氷浴中に置く5min取出ポストイン 35μl試薬6、混合後の室温静置（せいち） 5m私n;室温 8000回転/分遠心 5mに;新規 EPチューブ、追加 上澄み液100μl，100μl 試薬七、混合後 60℃水浴10min，そして取り出して、冷水で冷やす 5分、 412ナノメートル光吸収を測定し、A測定管

5. 標準パイプ：取る 0.5ml EPチューブ、追加 100μl標準品、100μl 試薬七、混合後 60℃水浴10min，コールド

水冷 5分、 412ナノメートル 光吸収を測定し、A. 標準管

注意：各サンプルはペアで管理する必要があります。

ERND 活性計算式：

a微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである

(1).蛋白質濃度で計算:

活性単位定義：37ホルムアルデヒドは 1つの酵素活性単位。

ERND 活性（nmol/min/mgprot）=C 標準品×V 標準品×A. 測定管－A 照合管理）÷A 標準管×希釈倍率÷（Cpr×V

様)÷T

=45×（A 測定管－A 照合管理）÷A 標準管÷Cpr。

(2).サンプル品質に基づいて計算:

活性単位定義：37℃において、試料1 g当たり1分間に1 nmolの触媒発生ホルムアルデヒドは 1つの酵素活性単位。

ERND 活性（nmol/min/g 鮮重）=C 標準品×V 標準品×（A 測定管－A 照合管理）÷A 標準チューブ×希釈倍数÷（W×V様）÷T

=45×（A 測定管－A 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷W

C標準品：0.05mmol/L=50μmol/LV標準品：100μl=1×10^-4 L、希釈倍数：V反総÷V 上清液=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酵素液蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定が必要であり、当社を使用することを提案商業信用分析

タンパク質含有量測定キット、W：サンプル品質、g；V サンプル：粗酵素液体積を添加し、10μl=0.01 ml、T：触媒反応時間（mに），

30分。

b使用する 96ウェルプレート測定の計算式は以下の通りである

(1).蛋白質濃度で計算:

活性単位定義：37ホルムアルデヒドは 1つの酵素活性単位。

ERND 活性（nmol/min/mgprot）=C 標準品×V標準品×A. 測定管－A 照合管理）÷A 標準管×希釈倍率÷（Cpr×V

様)÷T

=45×（A 測定管－A 照合管理）÷A 標準管÷Cpr。

(2).サンプル品質に基づいて計算:

活性単位定義：37ホルムアルデヒドは 1つの酵素活性単位。

ERND 活性（nmol/min/g 鮮重）=C 標準品×V 標準品×（A 測定管－A 照合管理）÷A 標準チューブ×希釈倍数÷（W×V様）÷T

=45×（A 測定管－A 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷W

C標準品：0.05mmol/L=50μmol/LV標準品：100μl=1×10^-4 L、希釈倍数：V反総÷V 上清液=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酵素液蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定が必要であり、当社を使用することを提案 商業信用分析タンパク質含有量測定キット、W：サンプル品質、g；V ；T：触媒反応時間（m私n）， 30分

赤カビsu-N-脱メチル酵素活性測定キットP 450シリーズ