アミノbiリンN脱メチル酵素（と）活性測定キット説明書

びりょうほう 100 かん/48 様

本測定前に必ず取る 2-3 個の予想差異の大きいサンプルを予測決定する測定意義：

さいぼうしきそシトクロムP 450 酵素は外因物質代謝の中で、特に薬物と毒物であり、重要な役割を果たす酵素系である。と としてシトクロムP 450酵素系の重要な一員であり、CYP3A4 亜型は、薬物の脱メチル化反応と密接に関連している。

測定原理：

と 触媒アミノbilinはホルムアルデヒドを放出し、 ナッシュ 比色法によりホルムアルデヒド含有量を測定すれば、計算することができる出 と 活性。

アミノbilin−N−脱メチル酵素活性測定キットP 450

構成：

試薬一：粉剤×1 ボトル、4℃保存します。臨用前加 100ml 蒸留水は十分に溶解する。

試薬三：粉剤×1 チューブ、4℃遮光保存使用前に追加 1ml 無水エタノール、十分に溶解する。試薬四：粉剤×1チューブ、4℃保存します。使用前に追加 0.5ミリリットル蒸留水、よく溶かす。

試薬五：粉剤×1 瓶、室温保存。使用前に蒸留水を加える 4ml 十分に溶解する。

標準液：液体×1 ボトル、-20℃保存します。臨用前取 1.5ミリリットル EP チューブ、追加 10μl 標準液、添加 990マイクロリットル 蒸留水、混合すると0.05 mmol/L 标准jia醛溶液，4℃保存します。

具体的な製品のパラメータは製品説明書を受け取ったパラメータを基準とする

自己準備機器と用品：

一般遠心機、超速遠心機、水浴釜、可変式移液銃、紫外分光光度計/酵素スケール、微量石英比色皿/96 穴プレート、蒸留水、無水エタノール、氷。

粗酵素液抽出：

1、細胞核、ミトコンドリアなどの高分子物質を除去する：約束する 0.5グラム 組織する 1 ミリリットル 試薬一、氷の上で十分に研磨し、10 000g 4℃離れる (はなれる)心（こころ） 30分、上清液を取って超速遠心管に転入する。

2、粗微粒子：4℃，100 000g、遠心分離 60分、上澄み液を捨てる。

3、ヘモグロビンなどの不純物を除去する：ステップへ 2 の沈殿に加えて 1ml 試薬一、蓋を締めて十分に振動溶解し、100 000g 遠心 30分、破棄上清液

4、最終微粒子：ステップへ 3 の沈殿に試薬二を添加する 0.5 ミリリットル、蓋を締めた後に十分に振動溶解、すなわち粗酵素液、測定を待つ。当該測定待ち液は

当日使用。

と 活性測定操作：

1. 分光光度計/酵素スケール予熱 30 分、波長を 412 ナノ、蒸留水をゼロに調整する。

2. 試薬2セット 37℃水浴中予熱 30分。

3. 照合管理：取る 1 支（し）EP チューブ、追加 10μl 粗酵素液、170マイクロリットル 試薬二、10μl 試薬3、10μl 蒸留水、混合後に置く 37℃

水浴保温 30分;すぐに参加する 35μl 試薬5、混合して氷浴中に置く 5分；取出ポストイン 35μl 試薬六、混合後の室温静置（せいち） 5分;室温 8000回転/分 遠心 5分;新しいものを取るEP チューブ、追加 100μl 上清液、100μl 試薬七、混合後 60℃水浴 10分を選択し、出、冷水で冷やす 5分、 412ナノメートル光吸収を測定し、A.照合管理

4. 測定管：取る 1 支（し）EP チューブ、追加 10μl 粗酵素液、170マイクロリットル 試薬二、10μl 試薬3、10μl 試薬四、混合後に置く 37℃

水浴保温 30分;すぐに参加する 35μl 試薬5、混合して氷浴中に置く 5分；取出ポストイン 35μl 試薬六、混合後の室温静置（せいち） 5分;室温 8000回転/分 遠心 5分；取 1 新しいのを支えるEP チューブ、追加 100μl 上清液、100μl 試薬七、混合後 60℃水湯 10分出、冷水で冷やす 5分、 412ナノメートル光吸収を測定し、A.測定管

5. 標準パイプ：取る 1 支（し）EP チューブ、追加 100μl 標準品、100μl 試薬七、混合後 60℃水浴 10分を選択し、出あ、冷たい水冷5分、412ナノメートル 光吸収を測定し、A. 標準管

注意：各サンプルはペアで管理する必要があります。

と 活性計算：

a微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

活性単位の定義：37℃中毎分ミリグラム当たりのタンパク質触媒産生 1nmol ホルムアルデヒドは 1 個の酵素活性単位。

と かっせい（nmol/min/mg タンパク質) =C 標準品×五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（Cpr五、サンプル)÷T

=45×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷Cpr。

（2）サンプル品質で計算

活性単位の定義：37℃中毎分1グラムの組織触媒生成 1nmol ホルムアルデヒドは 1 個の酵素活性単位。

と かっせい（nmol/min/g 鮮重 ) =C 標準品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（V 様

÷V サンプル×W）÷T

=45×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷W。

C 標準品：0.05 mmol/L=50μmol/L；五、 標準品：500μl=0.0005 L;希釈倍率：五、 反総÷V 上澄み液=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；心肺蘇生術：粗酵素液蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定が必要であり、当社を使用することを提案 商業信用分析タンパク質含有量測定キット、五、様：粗酵素液の体積を添加し、50μl=0.05ml；五、サンプル合計：抽出液体積、0.5ミリリットル；T：触媒反応時間（分），30分。

b使用する 96 オリフィスプレート測定の計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

活性単位の定義：37℃中毎分ミリグラム当たりのタンパク質触媒産生 1nmol ホルムアルデヒドは 1 個の酵素活性単位。

と かっせい（nmol/min/mg タンパク質) =C 標準品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（Cpr五、サンプル)÷T

=45×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん÷心肺蘇生術。

（2）サンプル品質で計算

活性単位の定義：37℃中毎分1グラムの組織触媒生成 1nmol ホルムアルデヒドは 1 個の酵素活性単位。

と かっせい（nmol/min/g 鮮重) =C 標準品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（V 様÷Vサンプル×W）÷T

=45×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん÷W。

C 標準品：0.05 mmol/L=50μmol/L；五、 標準品：500μl=0.0005 L;希釈倍率：五、 反総÷V 上澄み液=（50+850

+50+50+175+175）÷500=2.7；心肺蘇生術：粗酵素液蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定が必要であり、当社を使用することを提案 商業信用分析タンパク質含有量測定キット、五、 様：粗酵素液の体積を添加し、50μl=0.05ml；五、 サンプル合計：抽出液体積、0.5 ミリリットル；T：触媒反応時間（分），30分。

注意事項：

1、粗酵素液は当日に測定を完了し、保存する必要があれば、粗酵素液抽出ステップ 3 の沈殿に加えて 0.5ミリリットル 20%グリセリンを分注した後、

-80℃

2、試薬3と試薬4は使用前に調製する必要があり、当日使い切らなかった場合、4℃遮光保存、使用可能 1 週;

3、粗酵素液は直接蛋白濃度測定に用いることができ、推奨用 商業信用分析 タンパク質含量を測定する。

アミノbilin−N−脱メチル酵素活性測定キットP 450