さいぼうしきそB 5タイプ（さいぼうしきそ B 5タイプ）含有量測定キットの説明書

びりょうほう 100トン/96秒

本測定前に必ず取る 2-3 個の予想差異の大きいサンプルを予測決定する測定意義：

さいぼうしきそシトクロムP 450 酵素は主に肝臓に存在する同工酵素であり、外因物質の代謝に重要な役割を果たし、特に薬物と毒物の代謝。さいぼうしきそ シトクロムP 450 及びシトクロムB 5タイプ はいシトクロムP 450 酵素系の2つのヘモグロビン蛋白質、その比の変化と シトクロムP 450 代謝活性性は密接に関連している。

測定原理：

酸化型細胞色素 B 5タイプ 連結二亜*を還元した後、 424ナノメートル 最大吸収ピークがあり、測定により 424ナノメートル 和 490ナノメートル 吸光値の差異に応じて計算することができる出さいぼうしきそB 5タイプの含有量。

シトクロムb 5含有量測定キットP 450シリーズ

構成：

試薬一：粉剤×2 ボトル、4℃保存します。直前に追加 100ml 蒸留水、よく溶かす。

作動液の調製：

使用前に調製し、使い捨て手袋を着用し、試薬の三瓶の蓋を慎重に開け、試薬の二を加える 20ml 十分に溶解し、4℃遮光保存可能 1 週。

具体的な製品のパラメータは製品説明書を受け取ったパラメータを基準とする

自己準備機器と用品：

一般遠心機、超速遠心機、可変式ピペット、紫外分光光度計/酵素スケール、微量ガラス比色皿/96 オリフィスプレート、および蒸発留水

サンプル中のシトクロム B 5タイプ 抽出：

1、細胞核、ミトコンドリアなどの高分子物質を除去する：約束する 0.5グラム 組織する 1ml 試薬一、氷の上で十分に研磨し、10 000g 4℃離れる (はなれる)心（こころ） 30分

2、粗微粒子：100 000g，4℃遠心 60分、上澄み液を捨てる。

3、ヘモグロビンなどの不純物を除去する：ステップへ 2 の沈殿に加えて 1ml 試薬一、蓋を締めて十分に振動溶解し、100 000g 遠心 30分、破棄上清液

4、測定待ち液：ステップへ 3 の沈殿に試薬二を添加する 0.5ミリリットル

さいぼうしきそ B 5タイプ 含有量測定操作：

1. 分光光度計/酵素スケール予熱 30 分。

2. 作動液の配置 25℃水浴中予熱 30 分。

3. ブランク管：取る 1ml ガラス比色皿 10 μl 蒸留水、200マイクロリットル 作動液、室温静置 2 分，424ナノメートル 和 490ナノメートル くいこみ光の値、424ナノメートル ここでの吸光値はA. くうかん 1，490ナノメートル ここでの吸光値はA. くうかん 2。△A. くうかん=A. くうかん 1-A. 空（そら）ホワイトパイプ 2

4. 測定管：取る 1ml 玻璃比色皿，加入 10 μl 測定液、200マイクロリットル 作動液、室温静置 2 分，424ナノメートル 和 490ナノメートル くいこみ光の値、424ナノメートル ここでの吸光値はA. そくていかん 1，490ナノメートル ここでの吸光値はA. そくていかん 2。

△A. そくていかん=A. そくていかん 1-A. そくていかん 2。

注意：ブランクチューブを作るだけです。

B 5タイプ 含有量計算式：

a微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

さいぼうしきそB 5タイプ 含有量（nmol/mg タンパク質) = (△A. そくていかん-△A. くうかん)÷（ε×d）×V 反総÷（Cpr×V 様）

=122.8×(△A. そくていかん-△A. くうかん)÷Cpr

（2）サンプル品質で計算

さいぼうしきそB 5タイプ 含有量（nmol/g 新鮮な重量）= (△A. そくていかん-△A. くうかん)÷（ε×d）×V 反総×（五、 サンプル÷V 様）÷W

=61.4×(△A. そくていかん-△A. くうかん)÷W

ε：還元型シトクロムB 5タイプ ナノモル消光係数、171×10^-6 L/nmol/cm；d：比色皿の光径（センチメートル），1 cm； 五、 反総：反応系の総体積、210μl=2.1×10^-4 L；心肺蘇生術：測定対象液の蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定する必要がある、五、試料：反応系中の測定すべき液体の体積を添加し、10μl=0.01ミリリットル；五、サンプル総：測定する液体の総体積、0.5ミリリットル；W：サンプル品質（グラム）。

b使用する 96 オリフィスプレート測定の計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

さいぼうしきそB 5タイプ 含有量（nmol/mg タンパク質) = (△A. そくていかん-△A. くうかん)÷（ε×d）×V 反総÷（Cpr×V 様）

=245.6×(△A. そくていかん-△A. くうかん)÷Cpr

（2）サンプル品質で計算

さいぼうしきそB 5タイプ 含有量（nmol/g 新鮮な重量）= (△A. 测定管-△A. くうかん)÷（ε×d）×V ×（五、 サンプル÷V 様）÷W

=122.8×(△A. そくていかん-△A. くうかん)÷W

ε：還元型シトクロムB 5タイプ ナノモル消光係数、171×10^-6 L/nmol/cm；d：96 センチメートル），0.5 cm； 五、 反総：反応系の総体積、210μl=2.1×10^-4 L；心肺蘇生術：測定対象液の蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定する必要がある、五、試料：反応系中の測定すべき液体の体積を添加し、10μl=0.01ミリリットル；五、サンプル総：測定する液体の総体積、0.5ミリリットル；W：サンプル品質（グラム）。

シトクロムb 5含有量測定キットP 450シリーズ