アニリン−4−ヒドロキシ化酵素（AH）活性測定キット説明書

びりょうほう 100 かん/48 様

本測定前に必ず取る 2-3 個の予想差異の大きいサンプルを予測決定する測定意義：

さいぼうしきそシトクロムP 450 酵素は主に肝臓に存在する同工酵素であり、外因物質の代謝に重要な役割を果たし、特に薬物と毒物の代謝。あ にシトクロムP 450 酵素系におけるCYP2E1 サブタイプ、CYP2E1 薬の代謝に関与するだけでなく、触媒も多い種前発癌物質と前毒物の活性化過程。

測定原理：

あ アニリンの水酸基化を触媒して発生する 4-アミノフェノール、さらにフェノールに転換-インドール複合体は、 630ナノメートル 特徴吸収ピークがあり、通かそくてい 630ナノメートル吸光度増加率を計算するあ活性。

アニリン−4−ヒドロキシ化酵素（AH）活性測定キット

構成：

試薬一：粉剤×1 ボトル、4℃保存します。使用前に追加 100ml 蒸留水、よく溶かす。試薬三：粉剤×1ボトル、4℃保存します。使用前に追加 10ml蒸留水、よく溶かす。試薬四：粉剤×1ボトル、4℃保存します。使用前に追加 5ml蒸留水、よく溶かす。

試薬六：粉剤×1 ボトル（腐食性試薬）、4℃遮光保存使用前に追加 10ml 蒸留水、よく溶かす。試薬七：粉剤×1ボトル、4℃保存します。使用前に追加 10ml蒸留水は十分に溶解する。

標準液：液体×1 ボトル、10μmol/L，4℃遮光保存

具体的な製品のパラメータは製品説明書を受け取ったパラメータを基準とする

自己準備機器と用品：

一般遠心機、超速遠心機、可視分光光度計/酵素スケール、微量ガラス比色皿/96 オリフィスプレート、双蒸水、氷。

粗酵素液抽出：

1、細胞核、ミトコンドリアなどの高分子物質を除去する：約束する 0.5グラム 組織する 1ml 试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃，遠心 30分

2、粗微粒子： 100 000g 4℃、遠心分離 60分、上澄み液を捨てる。

3、ヘモグロビンなどの不純物を除去する：ステップへ 2 の沈殿に加えて 1ml 試薬一、蓋を締めて十分に振動溶解し、100 000g 遠心 30分、破棄

上清液

4、最終微粒子：ステップへ 3 の沈殿に試薬二を添加する 0.5ミリリットル、蓋を締めた後に十分に振動溶解、すなわち粗酵素液、測定を待つ。

測定操作：

1. 分光光度計/酵素スケール予熱 30 分、波長を 630 ナノ、蒸留水をゼロに調整する。

2. 試薬3セット 37℃水浴中予熱 30分。

3. 30分。

4. 取る 0.5 ミリリットル EP チューブ、追加 100μl 標準液、100μl 試薬6、100μl 試薬7、混合後の室温静置 30分，吸い取る 200マイクロリットルマイクロガラス比色皿/96オリフィスプレート、630ナノメートル光吸収を測定し、A.標準管

5. 照合管理：取る 0.5 ミリリットル EP チューブ、追加 50μl 粗酵素液、100μl 試薬3、50μl 蒸留水、混合後 37℃水浴中の保温 30分；

再加入 100μl 試薬五、混合後の氷浴 5分，11,000回転/分，4℃，离心 10分；取 100μl 上澄み液、新しいものを加える 0.5 ミリリットルEP チューブ再加入 100μl 試薬6、100μl 試薬7、混合後の室温静置 30分、吸い上げ 200マイクロリットル マイクロガラス比色皿/96 穴プレート、630ナノメートル光吸収を測定し、 A.照合管理

6. 測定管：取る 0.5 ミリリットル EP チューブ、追加 50μl 粗酵素液、100μl 試薬3、50μl 試薬四、混合後 37℃水浴中の保温 30分；

再加入 100μl 試薬五、混合後の氷浴 5分，11,000回転/分，4℃、遠心分離 10分；取 100μl 上澄み液、新しいものを加える 0.5 ミリリットルEP チューブ再加入 100μl 試薬6、100μl 試薬7、混合後の室温静置 30分、吸い上げ 200マイクロリットル マイクロガラス比色皿/96 穴プレート、630ナノメートル光吸収を測定し、 A.测定管。

あ かっせいけいさんしき：

a微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

活性単位の定義：37℃中の1 mg当たりのタンパク質の1分当たりの触媒産生 1nmol 4-アミノフェノールは 1 個の酵素活性単位。

あ かっせい（nmol/min/mg タンパク質) =C 標準品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（Cpr×Vサンプル)÷T

=2×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷Cpr。

（2）サンプル品質で計算

活性単位の定義：37℃中サンプル1 g当たり毎分触媒生成 1nmol 4-アミノフェノールは 1 個の酵素活性単位。

あかっせい（nmol/min/g 鮮重)=C 標準品×V 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（W×V 様)÷T

=2×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷W

C標準品：10μmol/L；五、標準品：100μl=1×10^-4L;希釈倍率： 五、反総÷V上澄み液=300μl÷100μl=3；心肺蘇生術酵素液蛋白質濃度（mg/ml）、別途測定が必要であり、当社を使用することを提案 商業信用分析 タンパク質含有量測定キット、W ：サンプル品質、五、様：反応系中の粗酵素液体積を添加し、 50μl=0.05 ml； T：触媒反応時間（分），30分。

b使用する 96 オリフィスプレート測定の計算式は以下の通りである

（1）蛋白質濃度で計算する

活性単位の定義：37℃中の1 mg当たりのタンパク質の1分当たりの触媒産生 1nmol 4-アミノフェノールは 1 個の酵素活性単位。

あ かっせい（nmol/min/mg タンパク質) =C 标准品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（Cpr×Vサンプル)÷T

=2×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷Cpr

（2）サンプル品質で計算

活性単位の定義：37℃中サンプル1 g当たり毎分触媒生成 1nmol 4-アミノフェノールは 1

あ かっせい（nmol/min/g 鮮重) =C 標準品五、 標準品×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A. ひょうじゅんかん×きしゃくばいすう÷（W×V 様)÷T

=2×（A. 測定管−A. 照合管理）÷A ひょうじゅんかん÷W

C 標準品：10μmol/L；五、 標準品：100μl=1×10^-4L;希釈倍率：五、 反总÷V上澄み液=300μl÷100μl=3；心肺蘇生術：粗酵素液蛋白質濃度（mg/ml），別途測定が必要な場合は、当社を使用することをお勧めします 商業信用分析 タンパク質含有量測定キット、 W ：サンプル品質、 五、様：反応系中の粗酵素液体積を添加し、 50μl=0.05 ml； T：触媒反応時間（分），30分。

アニリン−4−ヒドロキシ化酵素（AH）活性測定キット