マウスインターロイキン−1β

マウスインターロイキン−1βELISAキット

背景の紹介：

IL-1はIL-1 a、IL-1βの2種類に分けられ、ヒトとマウスのIL-1遺伝子は2番染色体に位置し、いずれも7つのエキソンを含む。IL−1は異なる属の中で高い相同性を有する。アミノ酸レベルでは、IL−1αとIL−1βはそれぞれ60%〜70%、75%〜78%であり、IL−1αとIL−1βは分子量約17.5 kDa、等電点はそれぞれ5と7、相同性は28%であった。17 kDaの成熟マウスIL−1βは、綿ネズミ及びラットのIL−1βと90%のアミノ酸配列同一性を有し、犬、馬、猫、人、豚及び猿のIL−1βと65〜78%の同一性を有する。

IL−1βは主に血液中の単核細胞とマクロファージから産生され、星形細胞、少突起神経膠細胞、副腎皮質細胞、NK細胞、内皮細胞、角質形成細胞、巨核細胞、血小板、ニューロン、好中球、骨芽細胞、許旺細胞、栄養層細胞、T細胞と繊維芽細胞もIL−1βを産生することができる。IL-1は広範な免疫調節作用を有し、熱誘発と炎症媒介作用がある。

検出原理：

ソラービオ （ソラービオ®)ELISAキットは二重抗体サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着検出技術を用いている。に抵抗マウスIL-1βモノクローナル抗体は酵素標準プレート上にカプセル化され、勾配希釈された標準品と予備希釈されたサンプル、標準品とサンプルにそれぞれ添加されたマウスインターロイキン1β酵素プレート上の被覆抗体と十分結合;洗濯板を洗った後ビオチン化抗を加えるマウスインターロイキン1β抗体、この抗体得とプレート上で抗体によって捕捉された標準品とサンプル中のマウスIL-1β特異的結合が発生する、洗濯板を洗った後ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識ストレプトアビジンを添加すると、ビオチンとストレプトアビジンが発生する高強度の非共有結合結合;洗濯板を洗った後発色剤基質TMBの添加，マウスIL-1β、HRPは無色TMBを異なる濃淡（正相関）の青色物質に変え、終止液を加えると反応孔は黄色になる、後、λmax=450 ナノ（外径＝450 nm）ここで反応孔試料の吸光度を測定する（OD）、サンプル内のマウスインターロイキン1β濃度とCD正比例して、標準曲線と4パラメータ適合ソフトウェアを描画することによって計算することができます出マウスインターロイキン1βの濃度です。

回路図：

注意事項：※※※

• キットは有効期限内に使用し、期限切れの試薬は使用しないでください。
• キット未使用時は2-8に保存する℃冷蔵庫、再溶解済みしかし未使用の標準品は、廃棄してください。
• キット使用前どうぞ室温で30回回復 分，試薬カートリッジ内の各種成分及び調製済みサンプル。
• 試験中に標準品とサンプルは復孔検査を提案し、試薬を添加する順序は*を維持しなければならない。
• 交差汚染を避けるために、試験に1次試験管、銃頭を使用してください，シーリングフィルム（※）及びクリーンプラスチック容器。.
• 濃縮ビオチン化抗体と濃縮酵素結合物の体積は少なく、輸送中に微量の液体が管壁や瓶に付着する

蓋をして、使用する前に遠心処理（5-10 SでOK）して、管壁の液体を管底部に集中させて、取る時、ピペットで何度も注意して吹き付けてください。

• キット内の濃縮洗浄液を除く和内包試薬本キットの単一成分の代わりに。
• 結果が正確であることを保証するために、毎回検査する要標準曲線を作る。

セキュリティのヒント：キット中の終止液は酸性溶液であり、オペレーターは使用時どうぞ手袋をはめて保護に注意する、操作中も血液サンプル及びその他の体液サンプルを測定する場合は、国家生物実験室の安全防護に関する管理規定に従って実行してください。

キット組成及び保管：

実験器材を持参する（提供せず、代理購入可能）

• 酵素スケール（主波長450 nm、基準波長630 nm）
• 高精度ピペット及び使い捨て吸込ヘッド：0.5-10、2-20、20-200-1000μl
• プレート洗浄機またはボトル洗浄
• 37℃かえる育つ箱
• 二重蒸発水、脱イオン水、メスシリンダなど
• 希釈用ポリプロピレン試験管

サンプル収集と保管：

• 細胞培養上清：

細胞培地を無菌遠心管に移し、4℃条件下で1000×gを10 min遠心分離し、上清を小EP管に等量分注し、−20℃で保存（24時間以内に検査して2-8℃に入れて保存することができる）、繰り返し凍結融解を避ける。

• 血清サンプル：

×gを10 min遠心分離し、上清を小EP管に等量分注し、−20℃で保存（24時間以内に検査して2-8℃に入れて保存することができます）、保存中に沈殿があれば、再度遠心して、繰り返し凍結融解しないでください。

• 血漿サンプル：

全血を抗血凝固剤を含む管に集め、標本の実際の要求に基づいてEDTA、クエン酸ナトリウムまたはヘパリンを抗凝固剤として選択し、20 min混合し、4℃条件下で1000×gを10 min遠心分離し、上清を小EP管に等量分注し、−20℃で保存（24時間以内に検査して2-8℃に入れて保存することができる）、繰り返し凍結融解を避ける。

※注意：血清血漿サンプルは溶血、高脂血サンプルの使用を避け、検査結果に影響を与えないようにする；サンプル内のターゲット測定濃度は標準品より高い値であり、サンプルを適切な倍数希釈後に測定し、本実験の前に希釈倍数を決定するための予備実験を行うことを提案した。

試薬準備：

• 試薬温戻し：まず実験の30分前に測定対象サンプル配置＃ハイチ＃室温下、濃縮洗浄液に結晶が現れたら、結晶がすべて溶解するまで37℃の温浴に入れてください。
• はいごう洗浄液：希釈後の洗浄液の使用体積を予め計算してから、二重蒸発水または脱イオン水で20倍濃縮洗浄液を希釈して使用液、未使用の濃縮洗浄液を入れる4℃冷蔵庫で保存する。

3. 標準品勾配希釈：サンプル希釈液（SR1）1ml2000pg/ml)，そして従って以下の濃度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/mlで希釈した。再溶解した標準品原液（2000pg/ml）未使用のものは廃棄するか、必要に応じて1回の使用量に分けて入れ、それを-20〜-80℃の冷蔵庫に保管し、具体的には図。

4. ビオチン化抗体作動液：あらかじめ計算しておく試験に必要な使用量、測定希釈液（SR2）100倍抗体濃縮液を希釈1倍にして作動液（希釈前によく混ぜる），どうぞ30分以内反応孔に加える。

ビオチン化抗体作動液の具体的なきしゃくほう次のようになります。

5. 酵素結合物作動液：毎回の試験に必要な使用量で調製し、酵素結合物で希釈液（S1倍のアプリケーション作動液（希釈前遠心分離）あ、30分以内にご利用ください。

酵素結合物作動液の具体的なきしゃくほう次のようになります。

6.

• 自動洗濯板：酵素標準板の穴の中の液体を振り切って、厚い重ねた吸水紙の上でたたいて乾かして、洗濯液を注入するのは3です00 ul/穴、注と吸出間隔は30秒、プレートを5回洗う。
• 手動洗濯板：酵素標準板の穴の中の液体を振り切って、厚い重ねた吸水紙の上でたたいて乾かして、洗濯瓶で洗濯液3を入れます00 ul/穴、30秒間静止した後に酵素標準板の穴の中の液体をきれいにして、厚い重ねた吸水紙の上でたたいて乾かして、板を5回洗います。

検出手順：

結果の判断：

1.酵素スケール450 nm波長を用いたOD値の測定。二波長検出を選択します。参照波長は630 nmです。二波長検出ができない場合は、450 nmのCD測定値引く630 nmのCD測定値

2.標準品、サンプルの平均OD値を計算する：各標準品とサンプルのOD値はゼロホールのOD値を減算すべきである

3.標準品濃度を横座標、吸光度OD値を縦座標とし、ソフトウェアで標準曲線を描き、サンプル中インターロイキン1β含有量は対応OD値は標準曲線から対応する濃度に換算される。

4.標本OD値が標準曲線の上限より高い場合、する適切に希釈した後再検出、濃度計算時に希釈倍数を掛ける。

パラメータキャラクタリゼーション：

1.データ及び標準曲線

マウスインターロイキン1βのサンプル含有量

2. 感度：

低検出可能マウスインターロイキン1β濃度が15pg/ml

20個のゼロ標準品濃度ODの平均値に2つの標準差を加えて、対応する検出可能濃度を計算する。

3. 特異性：

なしマウス「いいえ」、「いいえ」、「なし」を表す2、3、4、6、7、10IL-1a、IL-1Raとうはんのう

4. 再現性：

板内、板間変異係数<10%

5. 回収率：

選択した健康マウス血漿、細胞培養上清（細胞培養上清）、細胞培養上清（細胞培養上清）、細胞培養上清（細胞培養上清）、細胞培養上清（細胞培養上清）、細胞培養に3つの異なる濃度レベルのマウス「いいえ」、「いいえ」、「なし」を表す1βを選択し、回収率を計算します。

6. せんけいきしゃく：

選択したマウス血漿と細胞培養上清中高濃度を加えるマウス「いいえ」、「いいえ」、「なし」を表す1β、標準曲線動力学の範囲内で希釈を行い、線形を評価した。

参考文献：

1Dinarello、C.A.（1994）欧州サイトカインネットワーク。5:517.

2March，C.J.ら（1985）『ネイチャー』315:641.

3シムズ、JE等（1989年）プロ。ナトルアカデミック科学アメリカ86:8946.

4シムズ、JE等（1988年）科学241:585.

5黄など（1997）。ナートル。アーカド。科学。アメリカ94:12829.

6ウェッシェ、H.等（1997）J.バイオル。化学272:7727.

7シムズ、JE等（1993年）ナトルアカデミック科学アメリカ90:6155.

8Giri，J.G.ら（1994）疫学雑誌。153:5802.

9Symons，J.A.ら（1995）。ナートル。アーカド。科学。アメリカ92:1714.

10Wewers，M.D.ら（1997）免疫学雑誌。159:5964.

11Gonzales Hernandez，J.A.ら（1995）による臨床研究。実験免疫学99:137.

一般的な問題と解決方法：

マウスインターロイキン−1βELISAキット注文の説明：

1、ほとんどの製品は現物を備えており、一般的には当日出荷を注文することができる。
2、一部の非常用製品は、1－2日前に予約する必要があり、海外先物は3－6週間前に予約する必要がある。
3、一部の製品の価格は納期、ロットなどの要素によって変化し、もし変動があれば注文当日の新価格を基準とする。
4、毎日の注文締切時間は16時ちょうどで、一部の都市は17時ちょうどまで可能で、締切時間を超えて当日出荷できない場合は翌日に出荷を手配する。
5、代金の手続きが終わったら、注文書などを受取人の住所、名前、などと一緒にファックス、メール、などの形式で私たちに知らせてください。

輸送手順：

極低温製品：極低温製品の輸送中にドライアイスを入れて輸送する。ドライアイスで製品を包み、発泡箱で密封し、粘着テープを重ねて発泡箱に接着し、ソレボの箱に入れ、協力宅配便に渡し、安全で迅速で効率的で安心なお客様の手に渡り、製品の性質が安定していることを保証し、あなたの実験のために護衛します。
低温製品：低温製品の輸送中にソレイボ氷嚢を入れて輸送する。事前に氷嚢で製品を包み、発泡箱で密封し、粘着テープで発泡箱を厳密に密封し、ソレボの箱（保温効果が少なくて1週間持続可能）に入れ、それから協力宅配便に渡し、安全で迅速で効率的で安心なお客様の手に入れ、製品の性質が安定していることを保証し、あなたの実験のために護衛します。
常温製品：常温製品の輸送中に氷を入れたり、特殊な包装をしたりする必要はありません。製品は会社の倉庫員が迅速に配送し、正確で迅速で効率的な宅配便は製品が迅速にあなたの手に届くことを保証します。