ブチリル胆管*エステラーゼ阻害剤活性検出キット説明書

可視分光光度法

商品番号：BC5980

仕様：50トン/48秒

製品構成：使用前に試薬の体積と瓶内の体積が一致しているかどうかを真剣にチェックして、疑問があれば直ちにソレボスタッフに連絡してください。

溶液の調製：

1.試薬一：使用前に試薬一を1本採取し、添加する1.8ミリリットル蒸留水、十分に溶解し、使いきれない試薬-20℃分割して保存可能4周、繰り返し凍結融解を避ける（この試薬は凍結乾燥試薬であり、異なる瓶間の肉眼観察試薬量の差が大きく、量が少ない現象が存在する可能性があり、この現象は使用に影響せず、実際の品質は同じである）。

2.試薬四：使用直前に試薬二を17 mL加え、十分に溶解し、使い切れない試薬-20℃分割保存可能4周、繰り返し凍結融解を避ける。

3.試薬五：10 mmol/Lリヴァンスの明溶液。使用前に15μL 10 mmol/Lリヴァンスの明溶液を取り、985を加えたμL蒸留水、調製0.15mmol/Lリヴァンスの明溶液は、現在配合されている（この試薬は陽性管実験に用いられ、選択された）。

製品の説明：

ブチリル胆管*エステラーゼ（Butyrylcholinesterase，ブチリルコリンエステラーゼ，セクション3.1.1.8)、血漿胆*エステラーゼとも呼ばれ、仮性胆*エステラーゼは、肝臓から合成されて血液に入り、ほとんどの動物組織に存在するシルク*酸加水分解酵素である。アセチルコリン*エステラーゼ（痛み)に比べて、ブチリルコリンエステラーゼブチリル胆*やベンゾイル胆*などの大きな胆*エステルを効果的に加水分解することができ、有機リン系農薬、ウレタン系農薬などの神経毒剤の有害作用を除去することができる。研究によると、ブチリルコリンエステラーゼアルツハイマー病治療の重要な標的として、ブチリルコリンエステラーゼ抑制剤はアルツハイマー病患者の記憶力減退、認知機能障害などの症状の改善に用いられる。

BchE触媒ブタノイル胆*加水分解により胆*が生成され、胆*とジチオニトロ安息香酸（DNB）の作用により生成される5--ニトロ安息香酸（TNB），ブチリルコリンエステラーゼ抑制剤による抑制ブチリルコリンエステラーゼ活性であり、ブチルアルコール*の加水分解を減少させる。TNBに412ナノメートル吸収ピークがあり、測定により412ナノメートルにおける吸光度の変化を考慮し、BchE阻害剤活性を計算した。

注意：実験の前に2〜3つの予想される差異の大きいサンプルを選択して予備実験を行うことを提案する。

持参する機器と用品：

可視分光光度計、天秤、オーブン、粉砕器/すり鉢/ホモジナイザー、30-50目篩、超音波洗浄器、遠心分離機、水浴釜/恒温培養箱、1mLガラス比色皿、可変式ピペット、氷、蒸留水。

注意事項：

1.実験結果の正確性と安定性を保証するために、反応時間と操作時間を厳格に制御してください。

2.サンプル吸光度A’_測定1.5以上ΔA_測定近づくΔA_{空白（くうはく）}その際、サンプル処理工程で組織サンプルの割合を増加させるか、粉剤サンプルをより高濃度の溶液に調製してから測定することをお勧めします。当ΔA_測定0.01未満の場合は、サンプルを抽出液で希釈してから測定することができる。

3.異なる試薬、抽出物、薬物または組織によるBchEの抑制の程度を比較するためには、試薬、抽出物、薬物または組織ホモジネートを同じ濃度に調製して比較しなければならない。

実験例：

1mL抽出液は超音波抽出を行い、遠心分離後に上清を取り、測定手順に従って操作し、1mLガラス比色皿の測定計算：ΔA_{空白（くうはく）}=（A._空白1A._空白1）-（A._空白2A._空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_測定=（A._測定A._測定）-（A._空白2A._空白2）=（1.117-0.485）-（0.166-0.112）=0.578、抑制率の計算：

BchE阻害剤抑制率（%）=（1.113-0.578）÷1.113×100%=48.068%。

2.柿果皮サンプル0.1014 g（乾燥）を採取し、添加1mL抽出液は超音波抽出を行い、遠心分離後に上清を取り、希釈する16倍後測定手順に従って操作し、1mLガラス比色皿の測定計算：ΔA_{空白（くうはく）}=（A._空白1A._空白1）-（A._空白2A._空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_測定=（A._測定A._測定）-（A._空白2A._空白2）=（0.706-0.149）-（0.166-0.112）=0.503、抑制率の計算：

BchE阻害剤抑制率（%）=（1.113-0.503）÷1.113×100%=54.807%。

3.50μL 0.15 mmol/Lリヴァンスの明溶液を採取し、測定手順に従って操作し、1mL玻璃比色皿测得计算：ΔA_{空白（くうはく）}=（A._空白1A._空白1）-（A._空白2A._空白2）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_測定=（A._測定A._測定）-（A._空白2A._空白2）=（0.838-0.171）-（0.166-0.112）=0.613、抑制率の計算：

BchE阻害剤抑制率（%）=（1.113-0.613）÷1.113×100%=44.924%。

参考文献：

［1］Ellman GL、Courtney KD、Andres V Jr.など。新しい高速比色法によりアセチルコリンエステラーゼ活性を測定する［J］。生化学薬理学、1961、7（2）：88-95。

[2]ヌル・アタトレ、サラ・ラワシュダ、シェハ・サ・ネヤディ。などが挙げられる。構造に基づく仮想スクリーニングにより新たなブチリルコリンエステラーゼ阻害剤が発見された[J]。酵素抑制と薬物化学雑誌、2019、34（1）：1373-1379。

［3］李強、陳勇、ケイS.など、高効率選択性ブチリルコリンエステラーゼ阻害剤による認知改善と神経保護作用［J］。薬物化学雑誌、2021、64（10）：6856-6876。

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