グルコースオキシダーゼ（GOD）試験箱微量法

グルコース酸化酵素（GOD）試験箱
びりょうほう
商品番号：BC0695
仕様：100トン/96秒

製品内容：
抽出液：液体100 mL×1本、4℃保存、
試薬一：液体15 mL×1本、4℃保存、
試薬2：液体3 mL×1本、4℃保存、
試薬3：

製品の説明：
GOD（EC 1.1.3.4）は動物や植物に広く存在し、グルコースの酸化を触媒してグルコン酸を生成し、H 2 O 2を生成し、生体中で活性酸素を生成する代謝経路の一つである。
GODはグルコースを触媒してH 2 O 2を産生し、ペルオキシダーゼは酸素存在時にH 2 O 2の分解産生を触媒し、またオルトアニリンを酸化して有色物質を産生し、色の濃淡はグルコース酸化酵素活性と線形関係にある。

自己準備設備と機器が必要
可視分光光度計/酵素スケール、水浴釜、卓上遠心分離機、調整可能ピペット、微量比色皿/96オリフィスプレート、すり鉢、氷、蒸留水

操作手順
一、サンプル測定の準備
1、組織処理：約0.1 gの組織を秤量し、1 mLの抽出液を加えて氷浴均質化を行う、8000 g 4℃で10分間遠心分離し、上清を採取し、氷の上に置いて測定する。
2、血清（スラリー）：直接検査。
二、測定ステップ

2、GOD作動液の調製：15 mL試薬に3 mL試薬を加えて2混合し、PH 5.1を調整する（現在配合用）。
3、サンプル表：
試薬名称（μL）測定管
GOD作動液174
試薬三6
混合、37℃（哺乳類）または25℃（他種）水浴5 min
サンプル20
試料測定前にGOD作動液と試薬3を37℃の水浴に入れて保温した後、上記試薬を順に微量比
色皿/96オリフィスプレートでは、サンプルを加えながら計時を開始します。
三、GOD活力単位の計算
a.微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである
1、動物組織GODの活力の計算
（1）タンパク質濃度による計算
単位の定義：組織タンパク質1 mg当たり反応系中で1分間に1μmolの酸化型オルトアニリンの触媒産生を酵素活性単位と定義する。
GOD（U／mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反総÷（Cpr×V様）÷T＝1333×ΔA÷Cpr
（2）サンプルの鮮重で計算する

GOD（U/g鮮重）=ΔA÷（ε×d）×V反総÷（W÷V抽出×Vサンプル）÷T=1333×ΔA÷W
2、血清（パルプ）GOD活力の計算
単位の定義：1 mL当たり血清（スラリー）が反応系中で毎分触媒して1μmol酸化型オルトアニリンを産生することを酵素活性単位と定義する。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V逆総÷T÷Vサンプル=1333×ΔA
V反総：反応総体積、0.2 mL、Vサンプル：サンプル体積、0.02 mLを加える、V抽出、抽出液体積を加える、
1 mL、cpr：サンプルタンパク質濃度、mg/mL；W：試料鮮重、g、d：光径、1 cm、ε：酸化型オルトアニリン消光係数、7.5×10-3 mL/μmol/cm、T：反応時間、1 min。
b.96ウェルプレートで測定した計算式は以下の通りである

（1）タンパク質濃度による計算
単位の定義：組織タンパク質1 mg当たり反応系中で1分間に1μmolの酸化型オルトアニリンの触媒産生を酵素活性単位と定義する。
GOD（U／mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反総÷（Cpr×V様）÷T＝2222×ΔA÷Cpr
（2）サンプルの鮮重で計算する
単位の定義：1 gの組織が反応系中で毎分触媒して1μmolの酸化型オルトアニスアミンを生成することを酵素活性単位と定義する。
GOD（U/g鮮重）=ΔA÷（ε×d）×V反総÷（W÷V抽出×Vサンプル）÷T=222×ΔA÷W
2、血清（パルプ）GOD活力の計算
単位の定義：1 mL当たり血清（スラリー）が反応系中で毎分触媒して1μmol酸化型オルトアニリンを産生することを酵素活性単位と定義する。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V逆総÷T÷Vサンプル=2222×ΔA
mg/mL；
W：試料鮮重、g、d：光径、0.6 cm、ε：酸化型オルトアニリン消光係数、7.5×10-3 mL/μmol/cm、T：反応時間、1 min。
1、異なる均質組織におけるGODの活力は異なり、正式試験を行う前に1-2匹の予備試験をしてください、もしA 2-A 1>1ならば、

検出感度を高める。
実験中にA 1>A 2現象が発生する場合は、サンプル用抽出液を適切な濃度に希釈する.
2、良い二人は同時にこの実験をして、一人は色を比べて、一人は時間を計って、実験結果の正確性を保証します。
3、このキットは動物組織と動物血清（スラリー）にのみ適用できる。

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