ヒト臍帯静脈内皮細胞系

HUVECヒト臍帯静脈内皮細胞の永生化

l細胞同定

免疫蛍光同定に合格した

l細胞由来

国家資源庫（上海中国科学院）

l細胞背景

ヒト臍帯静脈内皮細胞系HUVECは比較的前に米国ATCCによって構築され、後に広く使用されていたが、近年細胞の源に交差汚染があることが発見され、現在は国際的に撤去されており、米国でも細胞に問題があることが発見されたため、新しいHUVE-Cを新たに建設したが、現在この細胞は国内に導入された後も種子の状態が悪く、使用できない。そのため、市場では使用可能な状態の良いヒト臍帯静脈内皮細胞HUVE-C細胞を見つけることは困難である。当社も適切な細胞がなく、同時に状態が良く、正確であるため、私たちは国内の原世代細胞の永生化学建系を作って、新しい正確な細胞を得ました：人臍静脈内皮細胞の永生化学細胞。単一内皮細胞マーカー免疫蛍光同定を提供する。細胞の呼び方：ヒト臍帯静脈内皮細胞永生化細胞、huve-cと同じタイプの細胞で、いずれもヒトに属する臍帯静脈内皮細胞で、呼び方が異なるだけでなく、国内で構築されているため、STR検定を提供することはできず、免疫蛍光検定を提供する。

l細胞特性

1）出所：ヒト臍帯組織

3）含有量：>1 x 106細胞数

4）規格：T 25本または1 mL凍結保存管包装

5）用途：科学研究用のみ。

l培養条件：

1）内皮細胞培養系の準備（推奨：PriMed-awcell-002）

内皮細胞培養基礎培地93%

子牛血清（FBS）5%

内皮細胞培養添加剤1%

ペニシリン/ストレプトマイシン、P/S 1%

2）培養条件：気相：空気、95%、二酸化炭素、5%。温度：37℃、培養箱の湿度は70〜80%である。

l注意事項：

ヒト臍帯静脈内皮細胞系HUVECは、壁貼り細胞の継代に対して以下の方法を参考することができる：

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.0.25%（w/v）トリプシン−0.53 mM EDTAを培養瓶に入れ（T 25瓶1−2 mL、T 75瓶2−3 mL）、37℃培養箱に入れて1−2分間消化し（消化しにくい細胞は適切に消化時間を延長することができる）、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、細胞の大部分が丸くなり脱落すると、速やかに操作台に戻し、培養瓶を軽くたたいた後、3−4 mlの10�S含有培地を加えて消化を停止した。

3.軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1：2の割合で新しいT 25瓶に分け、説明書の要求に従って配置された新しい*培地を6-8 ml添加して細胞の成長活力を維持し、その後の継代は実際の状況に基づいて1：2 ~ 1：5の割合で行った。

3）細胞凍結保存：細胞を受け取った後、前3世代の培養時に細胞種子を凍結保存し、後続の実験に備えることを提案する。

l輸送形態：

低温：（1）1 mL凍結保存管包装ドライアイス輸送、受け取った後-80度冷蔵庫で一晩保存した後、液体窒素に転入するか、直接回復し、もしドライアイスが揮発してきれいになり、凍結保存管キャップが脱落し、破損し、細胞に汚染があることを発見したら、すぐに私たちに連絡してください。

常温（2）T 25瓶で蘇生した生存細胞を常温出荷し、受け取った後は細胞受信後の処理方法に従って操作する。

l生物安全

1.すべての動物細胞は潜在的な生物危害性があると見なし、二級生物安全台内で操作しなければならない。そして、保護に注意して、すべての廃液とこの細胞に接触した容器は滅菌してから捨てることができる必要がある。

2.凍結保存細胞を回復する際には、保護手袋、衣類、保護マスクを着用することを推奨します。注意：凍結貯蔵管が液体窒素に浸漬すると漏れ、徐々に液体窒素が充満する。解凍時、液体窒素が気相に転化すると、容器が爆発したり、危険力で蓋を吹き飛ばしたりする可能性があり、舞い上がった屑が発生して人的被害を与える可能性がある。