結合デンプン合成酵素活性検出キット微量法

結合デンプン合成酵素活性検出キット微量法

注意：本測定前に必ず取る2-3個の予想差異の大きいサンプルを予測して決定する。

品番：紀元前3295年

仕様：100トン/96秒

製品内容：

ちゅうしゅつえき：液体100 mL×1本、4℃保存、

試薬一：30 mL×1本、4℃保存、

試薬二：粉剤×1本、4℃保存、

試薬三：粉剤×1本、-20℃保存、

試薬四：粉剤×2本、4℃保存、

試薬五：粉剤×1本、4℃保存、使用前に10 mLの試薬を加えて十分に混合して予備する、

試薬六：粉剤×1本、-20℃保存、使用前に500μLの二重蒸水を加え、十分に溶解して予備する。

試薬7：液体250μL×2本、-20℃保存、

試薬8：液体12.5μL×2本、各臨用前に溶解した4 mL試薬4を添加した。

はんのうえき一の配合：使用前に試薬2に14 mLの試薬1を加え、ゆっくり加熱し、徐々に昇温して溶解させ、冷却後に試薬3に加えて混合溶解する。

製品の説明：

GBSS（EC 2.4.1.21）はデンプン体中に束縛状態で存在し、デンプン鎖の延長反応を触媒し、主にアミロースの合成を担当する。

GBSS触媒ADPGはデンプンプライマー（デキストラン）と反応し、グルコース分子をデンプンプライマーに移し、同時にADPを生成する、さらにNADPは、反応系に添加されたピルビン酸キナーゼ、ヘキソキナーゼ、および6−リン酸グルコース脱水素酵素により順次触媒される⁺NADPHに還元し、ここでNADPH生成量は前の反応生成ADP数に比例し、340 nmでNADPHの増加量を測定することにより、GBSS活性を計算することができる。

持参する機器と用品：

紫外分光光度計/酵素スケール、水浴鍋、卓上遠心分離機、可変式ピペット、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、すり鉢、氷、蒸留水。

操作手順：

一、粗酵素液の調製

約0.1 gの組織を秤量して1 mLの抽出液を加え、氷浴中に均質にした。10000g ，4℃で10分間遠心分離し、上清を捨て、沈殿中に1 mLの抽出液を加えて十分に混合し、氷の上に置いて測定する。

二、測定ステップ

2、EPチューブに以下の試薬を順に添加する

混和直後に200μLの微量石英比色皿または96ウェルプレートに移し、340 nm波長で初期吸光度A 1と2 min後の吸光度A 2を記録し、ΔA＝A 2−A 1を計算した。

注意：試薬2沈殿があれば、添加前に十分に溶解させて混和させる。

三、顆粒結合デンプン合成酵素かっせいけいさん

一微量石英比色皿を用いて測定した計算式は以下の通りである：

1、サンプルタンパク質濃度で計算する：

単位の定義：組織タンパク質1 mg当たり1 mL反応系中で1分間に1 nmolのNADPHを触媒産生することを酵素活性単位と定義する。

GBSS活性（U／mg prot）＝［ΔA÷（ε×d）×V測定］÷（Cpr×V様÷V逆総×V上清）÷T＝432×ΔA÷Cpr

この方法では、サンプルタンパク質濃度を自己測定する必要があります。

2、サンプルの新鮮重に基づいて計算する

GBSS活性（U/g鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測定×10⁹］÷（W÷V抽出×V様÷V反総×V上清）÷T＝432×ΔA÷W。

V測定：測定体積、0.26 m L、Vサンプル：サンプル体積、0.1 m Lを加える、V反総：反応体積、0.31 mL、V上清：上清体積、0.15 mLを加える、V抽出：抽出液体積、1×10を加える^-3L、ε：NADPHモル消光係数、6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿の光径、1 cm、T：反応時間、2 min、Cpr：サンプルタンパク質濃度、mg/mL；W：サンプル品質、g。

b使用する96オリフィスプレート測定の計算式は以下の通りである：

1、サンプルタンパク質濃度で計算する：

単位の定義：組織タンパク質1 mg当たり反応系中で1分間に1 nmolのNADPHを触媒産生することを酵素活性単位と定義する。

GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測定]÷（Cpr×V様÷V逆総×V上清）÷T=720×ΔA÷Cpr。

この方法では、サンプルタンパク質濃度を自己測定する必要があります。

2、サンプルの新鮮重に基づいて計算する

単位の定義：各g組織が反応系中で毎分触媒して1 nmolのNADPHを生成することを酵素活性単位と定義する。

GBSS活性（U/g鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測定]÷（W÷V抽出×V様÷V反総×V上清）÷T=720×ΔA÷W。

V測定：測定体積、0.26 m L、Vサンプル：サンプル体積、0.1 m Lを加える、V反総：反応体積、0.31 mL、V上清：上清体積、0.15 mLを加える、V抽出：抽出液体積、1×10を加える^-3L、ε：NADPHモル消光係数、6.22×10^-3mL/nmoL/cm；d：比色皿の光径、1 cm、T：反応時間、2 min、Cpr：サンプルタンパク質濃度、mg/mL；W：サンプル品質、g。

結合デンプン合成酵素活性検出キット微量法注文の説明：

1、ほとんどの製品は現物を備えており、一般的には当日出荷を注文することができる。

3、一部の製品の価格は納期、ロットなどの要素によって変化し、もし変動があれば注文当日の新価格を基準とする。
4、毎日の注文締切時間は16時ちょうどで、一部の都市は17時ちょうどまで可能で、締切時間を超えて当日出荷できない場合は翌日に出荷を手配する。
5、代金の手続きが終わったら、注文書などを受取人の住所、名前、などと一緒にファックス、メール、などの形式で私たちに知らせてください。

輸送手順：

極低温製品：極低温製品の輸送中にドライアイスを入れて輸送する。ドライアイスで製品を包み、発泡箱で密封し、粘着テープを重ねて発泡箱に接着し、ソレボの箱に入れ、協力宅配便に渡し、安全で迅速で効率的で安心なお客様の手に渡り、製品の性質が安定していることを保証し、あなたの実験のために護衛します。
低温製品：低温製品の輸送中にソレイボ氷嚢を入れて輸送する。事前に氷嚢で製品を包み、発泡箱で密封し、粘着テープで発泡箱を厳密に密封し、ソレボの箱（保温効果が少なくて1週間持続可能）に入れ、それから協力宅配便に渡し、安全で迅速で効率的で安心なお客様の手に入れ、製品の性質が安定していることを保証し、あなたの実験のために護衛します。
常温製品：常温製品の輸送中に氷を入れたり、特殊な包装をしたりする必要はありません。