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アドレス
上海市浦東新区
概要
製品概要product description貝博 BBcellProbe抗酒石酸酸性ホスファターゼ染色液はナフトールAS-BIを基質とし、細胞内は酸性ホスファターゼによって加水分解されてリン酸とナフトールを放出し、ナフトールはジアゾニウム塩と結合して有色産物を生成し、細胞質中に局在し、細胞内のACPが抗酒石酸の活性があれば、陽性反応を示す。したがって、血液中TRAPを測定することで破骨細胞の機能状態を知ることができる。抗酒石酸酸性ホスファターゼは骨吸収と破骨細胞活性の良好な標識物であり、TRACPを測定することは生理条件と各種病理条件における骨代謝状況を理解するのに役立つ。正常なヒト肺胞マクロファージと白血に存在する。.....
製品詳細
ほぞんおんど
2-8℃遮光
注意事項
1.有効期間はキットが開封されない前に要求条件で保存された有効期間である。
2.試薬を開封したらできるだけ早く使用してください！
2.試薬を開封したらできるだけ早く使用してください！
有効期間
3ヶ月（注意：中の培養液は一度に調合し終わって、1週間以内に有効です！）
検出方法
顕微鏡
適用サンプル
1.パラフィン切片
2.凍結スライス
3.細胞塗布シート、クリープシート
4.血塗片等
2.凍結スライス
3.細胞塗布シート、クリープシート
4.血塗片等
計器の準備
1光学顕微鏡
2.染料シリンダー
3.ピペット
5.アイスボックス
2.染料シリンダー
3.ピペット
5.アイスボックス
試薬準備
じゅんすい
消耗品の準備
1.スライドガラス
2.吸込ヘッド
3.使い捨て手袋
2.吸込ヘッド
3.使い捨て手袋
使用上の考慮事項
1.TRAPインキュベーション液は効力を失いやすく、本法は皮膚穿刺血塗片を用い、乾燥後直ちに染色すべきである、
2.凍結切片を染色する場合、切片の室温暴露時間を減らすべきである。
3.サンプルは新鮮でなければならず、取材後すぐに処理しなければならない。そうしないと酵素の活性に影響を与える。
4.組織固定は4℃の冷蔵庫で行う必要があり、時間は24時間を超えてはならず、そうしないと酵素活性が弱まったり消えたりする。
5.一般的にはパラフィンでスライスすることは推奨されていない。パラフィン切片を使用する必要がある場合、組織はパラフィン包埋時、温度は56℃を超えるべきではない。融点52〜54℃のパラフィンワックスを用いてワックス浸漬を行うべきであり、ワックス浸漬時間は短く、そうしないと酵素活性が弱まったり消えたりする。
2.凍結切片を染色する場合、切片の室温暴露時間を減らすべきである。
3.サンプルは新鮮でなければならず、取材後すぐに処理しなければならない。そうしないと酵素の活性に影響を与える。
4.組織固定は4℃の冷蔵庫で行う必要があり、時間は24時間を超えてはならず、そうしないと酵素活性が弱まったり消えたりする。
5.一般的にはパラフィンでスライスすることは推奨されていない。パラフィン切片を使用する必要がある場合、組織はパラフィン包埋時、温度は56℃を超えるべきではない。融点52〜54℃のパラフィンワックスを用いてワックス浸漬を行うべきであり、ワックス浸漬時間は短く、そうしないと酵素活性が弱まったり消えたりする。
使用方法
（注意：中の培養液は一度に調合して、1週間以内に有効です！）
注意：その他の作動液は使用前に新鮮に調製してください、調製後すぐに使用して、一回で使用し終わって、放置してはいけません。
サンプルの染色処理：
一、血塗片及び骨髄塗片
1、プッシュスライス：
全血または骨髄3 ulの左右を取ってスライドガラス上に置き、スライドガラスをスライドガラスの30°角に保持し、血滴の正面に置き、少し後ろに移動して血滴と接触し、血滴はスライド下縁に沿って散開し、さらにスライドガラスの平面に沿って滑らかに前にスライドし、血滴が血膜を敷き終わるまで。細胞が少なすぎず、厚すぎず、重すぎないように薄くしないでください。
2、固定：
塗布片を空気中で自然乾燥させ、本キットの固定液Aに2 ~ 3分間入れて固定し、30 ~ 60秒間水洗した。
水洗後、乾燥しないうちに基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。乾きすぎると染色効果が悪くなります。
4、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
二、細胞塗布片及び細胞這片
1、固定：
細胞塗布片または細胞這片を本キットの固定液Aに入れて2〜3分間固定し、30〜60秒間水洗した。
2、孵化：
乾きすぎると染色効果が悪くなります。
3、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
三、凍結スライス
1、温度戻し：
−20℃の冷蔵庫に保存した凍結スライスをスライス棚に5〜10分間放置した。37℃のインキュベーションタンクに入れて温度を戻すか、スライス棚を小さな箱に入れて、箱を37℃の水浴鍋に入れて温度を戻すことができます。
2、水和：
3、固定：
スライスを空気中で自然乾燥させ、本キットの固定液に2 ~ 3分間入れて固定し、30 ~ 60秒間水洗した。
4、孵化：
水洗後、乾燥しないうちに基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。乾きすぎると染色効果が悪くなります。
5、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
四、パラフィン切片
キシレン中で5〜10分間脱蝋した。また、新鮮なキシレン脱ワックスを5〜10分間交換した。
2、浸漬：
無水エタノールを5分間浸漬する。さらに90%、70%エタノールをそれぞれ2分間用いた。
3、水和：
蒸留水に2分間浸漬する。
4、孵化：
乾燥前に基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。
5、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
結果分析：
陽性反応は鮮紅色または深紅色の粒子であり、細胞漿中に局在した。
注意：その他の作動液は使用前に新鮮に調製してください、調製後すぐに使用して、一回で使用し終わって、放置してはいけません。
サンプルの染色処理：
一、血塗片及び骨髄塗片
1、プッシュスライス：
全血または骨髄3 ulの左右を取ってスライドガラス上に置き、スライドガラスをスライドガラスの30°角に保持し、血滴の正面に置き、少し後ろに移動して血滴と接触し、血滴はスライド下縁に沿って散開し、さらにスライドガラスの平面に沿って滑らかに前にスライドし、血滴が血膜を敷き終わるまで。細胞が少なすぎず、厚すぎず、重すぎないように薄くしないでください。
2、固定：
塗布片を空気中で自然乾燥させ、本キットの固定液Aに2 ~ 3分間入れて固定し、30 ~ 60秒間水洗した。
水洗後、乾燥しないうちに基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。乾きすぎると染色効果が悪くなります。
4、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
二、細胞塗布片及び細胞這片
1、固定：
細胞塗布片または細胞這片を本キットの固定液Aに入れて2〜3分間固定し、30〜60秒間水洗した。
2、孵化：
乾きすぎると染色効果が悪くなります。
3、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
三、凍結スライス
1、温度戻し：
−20℃の冷蔵庫に保存した凍結スライスをスライス棚に5〜10分間放置した。37℃のインキュベーションタンクに入れて温度を戻すか、スライス棚を小さな箱に入れて、箱を37℃の水浴鍋に入れて温度を戻すことができます。
2、水和：
3、固定：
スライスを空気中で自然乾燥させ、本キットの固定液に2 ~ 3分間入れて固定し、30 ~ 60秒間水洗した。
4、孵化：
水洗後、乾燥しないうちに基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。乾きすぎると染色効果が悪くなります。
5、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
四、パラフィン切片
キシレン中で5〜10分間脱蝋した。また、新鮮なキシレン脱ワックスを5〜10分間交換した。
2、浸漬：
無水エタノールを5分間浸漬する。さらに90%、70%エタノールをそれぞれ2分間用いた。
3、水和：
蒸留水に2分間浸漬する。
4、孵化：
乾燥前に基質培養液に60分間光を避けてインキュベートした。
5、再染色：
インキュベーション終了後、水で1分間洗浄し、ガラスが乾く前に再染色を行った。ヘマトキシリンで1〜2分間、またはメチルグリーンで2〜3分間、いずれかを選択すればよい。
結果分析：
陽性反応は鮮紅色または深紅色の粒子であり、細胞漿中に局在した。
FAQ解析
1細胞誘導は成功しなかったか？
細胞系または初代BMM細胞が破骨細胞を誘導する場合、サイトカインの質は重要である。誘導効果が悪い場合は誘導条件を調整し、RANKL濃度を高めるか、M-CSFを添加するかどうかを試みることができる。
2.どのようにして陽性細胞を判断しますか。
多核にTRAP陽性を加えることで多核破骨細胞といえると考えられている。
細胞系または初代BMM細胞が破骨細胞を誘導する場合、サイトカインの質は重要である。誘導効果が悪い場合は誘導条件を調整し、RANKL濃度を高めるか、M-CSFを添加するかどうかを試みることができる。
2.どのようにして陽性細胞を判断しますか。
多核にTRAP陽性を加えることで多核破骨細胞といえると考えられている。
参考文献
1.Guiping Chen等。
BergaptenはNF−κBとJNK信号経路を抑制することによりRANKL誘導破骨細胞生成と卵巣切除誘導骨粗鬆症を抑制する
2019年生化学・生物物理学研究通信
2.費文勇など。
厚朴フェノールは、核因子κBとフィブリノゲン活性化蛋白質キナーゼ経路を抑制することにより破骨細胞生成を抑制し、卵巣切除術による骨損失を予防する
国際分子医学雑誌2019
BergaptenはNF−κBとJNK信号経路を抑制することによりRANKL誘導破骨細胞生成と卵巣切除誘導骨粗鬆症を抑制する
2019年生化学・生物物理学研究通信
2.費文勇など。
厚朴フェノールは、核因子κBとフィブリノゲン活性化蛋白質キナーゼ経路を抑制することにより破骨細胞生成を抑制し、卵巣切除術による骨損失を予防する
国際分子医学雑誌2019
