概要

総タンパク質抽出キットに含まれる処方は、細胞質膜、核膜、および様々な細胞器官膜を含む細胞膜成分を効果的に溶解することができる。本キットに含まれるプロテアーゼ阻害剤混合物は、プロテアーゼによるタンパク質の分解を阻止し、高純度のタンパク質を抽出するために保証を提供する。

製品詳細

ほぞんおんど2-8℃

総蛋白抽出キット注意事項

1.プロテアーゼ阻害剤は蓋を開けずに使用する前に2〜8℃で保存することもできる。蓋を開けて使用した後-20℃で貯蔵する。
2.プロテアーゼ阻害剤は2〜8℃の低温で固体状態であり、冷蔵庫から取り出した後、室温または37℃の短時間水浴に戻し、液体状態になった後、遠心して管底部まで蓋を開けた。

有効期間

一年

検出方法

WB、IP、co-IP、ELISA、EMSA等

適用サンプル

動物細胞/組織

総蛋白抽出キット製品の特徴

1.使用が便利で、細胞、組織から抽出したタンパク質は研磨、繰り返し凍結融解、超音波破砕などの前処理を必要としない。
2.抽出過程は簡単で便利で、蛋白質抽出の時間を30分-1時間に短縮する。
3.タンパク質安定剤を含み、抽出したタンパク質は安定している。

5.総蛋白抽出液は多種の有効成分を含み、細胞質蛋白、核蛋白と膜蛋白を十分に放出することができ、また放出された蛋白を結合して沈殿を防止することができる。
6.プロテアーゼ阻害剤は蛋白質の分解を抑制し、プロテアーゼ阻害剤の処方を最適化する。プロテアーゼインヒビター混合物は6種類の独立したプロテアーゼインヒビターAEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Peppstatin A、Bestatin、E-64を含み、各インヒビターは特定のプロテアーゼ活性を特異的に抑制することができる。この混合物の最適化された組成は、プロテアーゼ、半プロテアーゼ、アスパラギンプロテアーゼ、アラミド−アミノペプチド酵素などを含むほぼすべての重要なプロテアーゼ活性を抑制することができるようにする。

製品アプリケーション

WB、IP、co-IP、ELISA、EMSA等

計器の準備

1.遠心分離機
2.発振器
3.ホモジナイザー/ホモジナイザー
4.スクロールミキサ
5.ピペット
6.冷蔵庫。（2）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。）冷蔵庫。（3）冷蔵庫。（3
7.アイスボックス

試薬準備

1.PBS緩衝液
2.タンパク質定量キット

消耗品の準備

1.遠心管
2.吸込ヘッド
3.使い捨て手袋

使用上の考慮事項

プロテアーゼ阻害剤は2-8℃で固体状態であり、冷蔵庫から取り出した後、室温または37℃の短時間水浴に戻り、液体状態になった後、管底部まで遠心して蓋を開ける。
実験中のすべての試薬は予冷しなければならない。すべての器具は-20℃の冷蔵庫で予冷しなければならない。全過程でサンプルを低温に維持しなければならない。
プロテアーゼ阻害剤の貯蔵期間中に溶液が沈殿した場合、使用に影響せず、溶解後正常に使用する。
キットを短時間で使い切ることができなければ、プロテアーゼ阻害剤混合物を一度にすべて抽出液に加えることはできない。
自己実験の必要に応じて他のプロテアーゼ阻害剤単品を添加することができる。
下流実験が特定プロテアーゼまたはホスファターゼの酵素活性測定を行う場合、抽出液はプロテアーゼ阻害剤またはホスファターゼ阻害剤を添加しなくてもよく、抽出過程が低温操作を維持し、遠心時間を短縮することに注意する。
Western Blot実験内の参はbeta-actin、GAPDH、Tubulinを選択することができる。
g=r×1.118×10-5×rpm 2（rは有効遠心半径、即ち遠心機の軸心から遠心収集管の底部中心位置までの長さ、単位はセンチメートル）、例えば回転数が3000 rpm、有効遠心半径が10 cmであれば、相対遠心力（RCF、×g）は=10×1.118×10-5×30002=106.2（×g）で換算する必要がある。

使用方法

細胞サンプルの総蛋白抽出：
懸濁細胞タンパク質抽出：
1.抽出液の準備：
500μlの冷たい全タンパク質抽出液に2μlのプロテアーゼ阻害剤混合物と2μlのホスファターゼ阻害剤混合物を添加し、混合した後、氷上に置いて予備する。

3.細胞を冷PBSで2回洗浄し、洗浄のたびにできるだけ上清を吸引乾燥した。
4.5×106-1×107個の細胞（約50 mg細胞/50μl細胞沈殿体積）に500μlの冷たい総蛋白質抽出液を添加し、吹き付けて混合した後、4℃条件下で20-30分間振動し、細胞が十分に分解され、明らかな細胞沈殿がなかった。
5.4℃、12000×gの条件下で15分間遠心分離した。
6.上清を別の予冷されたきれいな遠心管に吸い込むと、総蛋白質が得られる。
7.上記タンパク質抽出物を定量した後、−80℃の冷蔵庫に分注して保存するか、下流実験に直接使用する。

壁細胞タンパク質抽出：
1.抽出液の準備：
500μlの冷たい全タンパク質抽出液に2μlのプロテアーゼ阻害剤混合物と2μlのホスファターゼ阻害剤混合物を添加し、混合した後、氷上に置いて予備する。
2.壁貼り細胞の培養液を慎重に吸引する。

4.適量の冷たい総蛋白質抽出液を加え、15〜30分間振動させ、細胞が十分に分解されるまで、細胞ドクターで一回掻き、分解液を別のきれいな遠心管に吸い込む。
5.4℃、12000×gの条件下で15分間遠心分離した。
6.上澄みを別の予冷されたきれいな遠心管に吸い込むと、総蛋白質が得られる。
7.上記タンパク質抽出物を定量した後、−80℃の冷蔵庫に分注して保存するか、下流実験に直接使用する。
組織サンプルの総蛋白抽出：
1.抽出液の準備：
500μlの冷たい全タンパク質抽出液に2μlのプロテアーゼ阻害剤混合物と2μlのホスファターゼ阻害剤混合物を添加し、混合した後、氷上に置いて予備する。
2.50-100 mgの組織サンプルを採取し、PBSで洗浄し、その後ナイフでできるだけ切断し、500μlの総蛋白抽出液を加え、組織ホモジナイザー/ホモジナイザーで明らかな肉眼で見える固体がないまでホモジした。
3.組織ホモジネートを、4℃条件下で10〜20分間振動させるために、予冷された清浄な遠心管に吸い込む。

5.上澄みを別の予冷されたきれいな遠心管に吸い込むと、総蛋白質が得られる。
6.上記タンパク質抽出物を定量した後、−80℃の冷蔵庫に分注して保存するか、下流実験に直接使用する。

FAQ解析

1.蛋白質濃度が低い？
組織サンプルの一部を処理する際に分解がない可能性があり、蛋白質濃度が低い。試薬Aの処理時間を適切に延長すればよい。発振を継続する条件下で処理すると、発振器がなくても数分間隔で吸込口で均等に吹き付けることができる。

2.細胞分解速度が遅い？
抽出で得られたタンパク質の活性を十分に保証するために、抽出液は保護タンパク質の処方を採用し、分解能力が温和で、下流の応用範囲が広い。分解の時間を適切に延長すればよい。

3.どのような方法でタンパク質を定量しますか。
BCA法をお勧めします。透析処理を行った場合、または脱塩カラムで緩衝系を交換した場合は、Bradford法で定量することができる。

4.抽出時にコロイド沈殿が出現したか？
タンパク質抽出液処理生成物には少量の透明コロイドが出現することがあり、正常な現象である。この透明コロイドはゲノムDNAなどを含む複合体である。ゲノムDNAと特に密接に結合した特定のタンパク質を検出しない場合は、直接遠心分離して上清を取って後続の実験を行えばよい。ゲノム結合に特に緊密なタンパク質を検出する必要がある場合は、超音波処理、300 w/10秒間隔10秒、超音波3分、その後遠心分離により上澄みを後続の実験に用いることができる。NF−kappaB、p 53などの一般的な転写因子を検出する場合は、超音波処理を行う必要はありません。

5.抽出したタンパク質は活性がありますか。
本キットはイオン型洗浄剤成分を含まず、蛋白質の構造を破壊せず、蛋白質間の既存の相互作用に対する破壊がなく、蛋白質はすべてその天然の立体構造と活性を維持する。

同類製品の推奨