SILAC代謝標識定量実験サービス

SILAC代謝標識定量実験サービス

実験技術概要：SIL ACの基本原理はそれぞれ天然同位体（軽型）または安定同位体（重型）で標識された必須アミノ酸で細胞培地中の対応するアミノ酸を置換し、細胞は5-6の倍増周期を経た後、安定同位体標識のアミノ酸*は細胞が新しく合成した蛋白質に組み込まれて元のアミノ酸を置換した。異なる標識細胞の分解タンパク質を細胞数またはタンパク質量などの割合で混合し、分離、精製後に質量分析鑑定を行い、一級質量分析図中の2つの同位体型ペプチドセグメントの面積比較に基づいて相対定量を行った。体内代謝マーカー法に属する。

実験操作フロー：

1、蛋白質抽出とサンプル調製

2、標識効率試験

3、サンプル混合台

4、SDS-PAGE等級付け

5、酵素分解

6、質量スペクトル鑑定

7、ソフトウェア分析

8、定性定量蛋白質群の結果

9、生物情報学データマイニングと統計分析

実験上の注意：

顧客提供：

1、タンパク質抽出物： 濃度>1μg/ul、蛋白質総量>300μg.

2、細胞：細胞計数により2 x 106個以上の細胞をEP管に採取し、生理食塩水または蛋白保護剤0 5 mlを添加し、混合後冷蔵庫に保存する（−80°C、繰り返し凍結融解を避ける）。

提供基準：

1、蛋白質鑑定とSIL AC定量分析結果、

2、顧客指図蛋白質に対応する質量スペクトルピーク図、

3、SIL AC実験の完全な実験ステップ、使用機器、ソフトウェア検索パラメータなど。

その他：

1、SILACは体内標識技術であり、安定同位体標識のアミノ酸は天然アミノ酸と化学的性質は基本的に同じであり、標識された細胞と非標識細胞は生物学的行為にほとんど差異がなく、標識効率は100%に達することができる。

2、質量スペクトル定量を採用し、定量結果が正確で、ロット変異が小さく、再現性が良い。

3、体内代謝標識はSDS-PAGE或いはクロマトグラフィー分離技術と結合し、疎水性蛋白と偏塩基性蛋白を互換し、蛋白質の性質に制限されない。

4、複数のサンプルを混合した後、同時に分離、酵素切断と鑑定を行い、後続の実験がサンプルに与える影響は一致し、実験操作と機器設備による影響を減少した。

5、この技術は体内標識に属しているため、標識効果は安定しており、その標識効率は分解液の影響を受けず、全細胞蛋白の分析だけでなく、膜蛋白の鑑定と定量にも適している。

6、SIL AC法のタンパク質必要量は化学標識に比べて明らかに減少し、通常、サンプル当たり数十マイクログラムのタンパク質量しか必要としない。

7、生体マーカーは、サンプルの実際の状態により近い。

8、生体培養にしか適していない細胞は、生物医学研究でよく使われる組織サンプルに対して、体液サンプルなどは分析できず、動物モデルに対する標識コストが大きすぎて、実現できない。体外マーキング技術と比較して、SIL ACは体内マーキングに属し、以下の技術的優位性がある

1、高スループット、同時に数百から数千種類の蛋白質を鑑定し定量することができ、

2、定量精*&確、サンプル調製の違いによる実験差を低減する、

3、線形定量範囲が広い、

4、感度がより高く、タンパク質の必要量が明らかに減少した、

5、標識は体内標識技術を採用し、サンプルの本当の状態に近い。

SILAC技術サービス内容

1、細胞同位体標識；

3、SDS-PAGE分離、

5、データベース検索及び蛋白質定量分析；

6、差異蛋白の生物情報学的分析、

7、実験報告書の提出。

実験サービス報告内容

1、蛋白質定量鑑定とSIL AC定量分析結果、

2、顧客指図蛋白質に対応する質量スペクトルピーク図、

3、SIL AC実験の完全な実験ステップ、使用機器、ソフトウェア検索パラメータなど。

技術サービスの利点

1、感度が高く、検出限界が低く、低存在度蛋白を検出することができる、

2、分離能力が強く、分析範囲が広く、iITRAQは高分子量蛋白質、酸性蛋白質とアルカリ性蛋白質、膜蛋白質と不溶性蛋白質を含む任意のタイプの蛋白質を分離鑑定することができ、

3、高スループット：同時に8つのサンプルを分析し、実験スループットを高め、同時に複数の時点または異なる処理の蛋白質を分析することができる、

4、結果の信頼性：定性と定量分析結果はより信頼性が高い、

5、自動化の程度が高い：液相と質量スペクトルの併用、自動化操作、分析速度が速く、分離効果が良い。

実験代行サービス：