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上海市北青道路6725弄6号2棟2階B区
上海研謹生物科学技術有限公司
上海市北青道路6725弄6号2棟2階B区
ゼラチンスペクトルMMP(2/9)検出実験
酵素スペクトル法(Zymography)はSDS−PAGE電気泳動と反転ゲル染色のプロテアーゼ検出方法に基づいてMMP−2、MMP−9活性を検出し、感度は10 pgに達し、ELISA方法より高かった。
基本原理と手順は:コラーゲン基質を添加したSDS-PAGEゲルでプロテアーゼ含有サンプルを分離し、電気泳動終了後にゲルと酵素反応Buferを取り出してインキュベートし、ゲル染色と脱色する。ゲル中は基質タンパク質を含むことで深く染色され、暗い背景を形成するが、プロテアーゼストリップがある位置では、プロテアーゼはゲル中の基質タンパク質を分解するので、染色されずに透過領域を形成し、MMP-2、MMP-9の位置(酵素スペクトル)を同時に指示することができ、サンプルに血液、滲出液、細胞抽出物などがあることを検出することができる。
サービスサイクル:10営業日
結果提供:結果報告、代表的な画像、操作フロー及び関連試薬機器情報。
ゼラチンスペクトルMMP(2/9)検出実験サンプル提供に必要な知識:
1)顧客は実験グループ、番号及び背景設計資料を知らせ、具体的な要求は事前に説明してください、
2)標本収集、保存と輸送:
①組織サンプル:新鮮な組織を液体窒素または-70度に入れて保存し、組織は100 mg以上、
②培養細胞:細胞計数により2 x 106個以上の細胞をEP管に採取し、0.5 ml生理食塩水を添加し、混合後冷蔵庫に保存する(−70°C、繰り返し凍結融解を避ける)、
③血液細胞標本:抗凝固管で血液サンプルを保存するか、リンパ球分離液で細胞を分離した後、生理食塩水0.5 mlを添加し、保存する(−70°Cは長期保存でき、繰り返し凍結融解を避ける)
④血清或いは細胞培養液標本:遠心分離して不純物を取り除いた後、清を取ってEP管に入れ、保存する(49 Cは15-20日間保存でき、-70°Cは長期保存でき、繰り返し凍結融解を避ける)
4)サンプル輸送:
①組織サンプル、細胞サンプルをドライアイスで輸送する、
②細胞サンプルは培養瓶に直接送ることもできる(密封して汚染せず、培養液が漏れないことを保証する)、
③血清または上澄み液を直接氷嚢に入れて送る(2、3日ほどの道のりで届く)。
お客様の注意事項:
検査システムは陽性参照または内参を含み、見積もりは蛋白抽出を含む
実験上の注意:
1.ポリアクリルアミドを製造する際に気泡を排除することに注意しなければならない。
2.ゼラチン酵素スペクトルの活性はカルシウムイオン、亜鉛イオン、PH値などの要素の影響を受けているので、緩衝液の調製は厳格で正確で、できるだけ超純水を使用して、インキュベーション温度もよく把握しなければならない。
3.大きな櫛で
4.培養液のPHは7.5-7.6で、復性のTRITONは時間が長くなると綿状物があるので、実験時にできるだけ新鮮な配置のものを使用する。
5.インキュベーションの37度はCO 2培養箱に入れないでください。インキュベーション液のPH値を変えるので、通常のインキュベーション箱でいいです。
6.ゼラチンは4度保存し、配合後1週間以内に使用する
実験代行サービス:
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