アポトーシス因子Caspase-389検出実験

アポトーシス因子Caspase-389検出実験

Caspase3

システアスパラギンは、細胞アポトーシスの過程で重要な役割を果たすプロテアーゼファミリーです。Caspase 3はCPP 32とも呼ばれ、細胞アポトーシス過程における重要な酵素であり、procaspase 2.6.7と9を切り取ることができ、多くのcaspase基質を直接特異的に切り取ることができ、以下を含むPARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolinとfodrinなど。caspase 3によって媒介されるこれらのタンパク質せん断は、アポトーシス分子機構の重要な構成要素である。caspase 3は細胞核アポトーシス過程においても重要な役割を果たし、染色質固体を含む

縮、DNAの**断片化など。同時にcaspase 3は細胞発泡（Cell blebbing）にも重要な役割を果たしている。

検出原理はcasepase 3に基づいて基質AC-DEVD-pNAを触媒して黄色のpNA(-itroaninline)を生成することができ、それによって吸光度を測定することによってcaspase 3の活性を検出することができる。pNAは405 nm付近で強い吸収を示した。黄色生成物pNAから作製した標準曲線を参照すると、caspase 3酵素活性を定量する標準品とすることができる。

システアスパラギン-8

Caspase 8は通常酵素原の形で存在し、細胞アポトーシスのシグナル伝達過程で活性化され、Caspase 8は細胞アポトーシスシグナル伝達過程で上流のcaspaseと考えられ、Fas-receptorとTNFR-1が媒介する細胞アポトーシス過程でcaspase 8が活性化され、p 18とp 10からなる二量体を形成し、下流のcaspase 4、caspase 6をさらに活性化する。caspase 9とcaspase 10。本方法はCaspase 8に基づいて基質AC-IETD-pNAを触媒して黄色のpNA(-nitraniline)を生成することができ、それによって吸光度を測定することによってCaspase 8の活性を検出することができる。pNAは405 nm付近で強い吸収を示した。測定サンプルの405 nm OD値はpNA作成の標準曲線を参照し、サンプルのCaspase 8酵素活性を計算することができる。

システアーゼ-9

Caspase 9はICE-LAP 6またはMch 6とも呼ばれ、細胞であるしぼむ信号伝導中の上流のcaspase。ミトコンドリアがシトクロムcを放出した後、caspase 9はシトクロムcおよびApaf 1と複合体を形成し、同時に活性化することができる。活性化されたcaspase 9は、アポトーシスの重要な酵素caspase 3を活性化し、それによって後続のアポトーシスシグナルを促進することができる。Caspase 9の活性化はリン酸化によって制御することができる。

本方法はCaspase 9に基づいて基質Ac-LEHD-pNA産生「黄色を生成するpNA（p-nitronine）を触媒することができ、それによって吸光度を測定することによって検出することができる

Caspase 9の活性。pNAは405 nm付近で強い吸収を示した。測定サンプルの405 nm OD値はpNA作成の標準曲線を参照し、サンプルのCaspase 9酵素活性を計算することができる。

Caspase1

Caspase2

Caspase4

Caspase6

アポトーシス因子Caspase3/8/9検査サンプルの準備：

1）細胞サンプル：1 x 107個の細胞（T 25の培養ビン細胞量約1個）を採取し、600 g 4°Cで5分間遠心分離して細胞を収集し、上清を慎重に吸引除去し、PBSで1回洗浄した。上清を吸引した後、各管細胞サンプルに100 u｜分解液を加えて再懸濁沈殿し、氷浴で15分間分解した。4°C 16000 gを10〜15分間遠心分離し、上清を氷浴予冷遠心管に移した。caspase 3の酵素活性または−70°C保存試料を直ちに測定した。同時に少量のサンプルを採取してBradford法で蛋白濃度を測定することができ、できるだけ蛋白濃度を1-3 mg/mlにすることができる.

2）組織試料：約10 mgの組織ごとに100 ul溶解液を添加し、氷浴上でガラスホモジナイザーで均質化した。その後、スラリーを1.5 ml）遠心管に移し、氷浴をさらに5分間分解した。4°C 16000 gを10〜15分間遠心分離し、上清を氷浴予冷遠心管に移した。caspase 3の酵素活性の即時測定または-70°C保存

サンプル。同時に少量のサンプルを採取してBradford法で蛋白濃度を測定することができ、できるだけ蛋白濃度を1-3 mg/mlにすることができる.

Caspase-3活性検出標準曲線

実験周期：7-10営業日以内に完成し、繰り返し検査優遇。

お客様の注意事項

1.抗体：事前相談上海は謹んで研究している生物、抗体種属及びその抗体が使用できるかどうかを明らかにする。もし双方が協議して決めることができなければ、お客様は自分で購入して提供したり、当社が代理購入したりすることができます。

2.標本収集と保存：

①組織サンプル：新鮮な組織を液体窒素または70度に入れて保存し、組織は100 mg以上（緑豆の大きさ程度）である、

②培養細胞：細胞計数により00000個以上の細胞をEP管に採取し、生理食塩水或いは蛋白保護剤0.5 mlを添加し、混合後冷蔵庫に保存する（−70°C、繰り返し凍結融解を避ける）、

③血液細胞標本：抗凝固管で血液サンプルを保存するか、リンパ球分離液で細胞を分離した後、生理食塩水または蛋白保護剤0.5 mlを添加し、保存する（−70°Cは長期保存でき、繰り返し凍結融解を避ける）

④血清或いは細胞培養液標本：遠心分離して不純物を取り除いた後、清を取ってEP管に入れ、保存する（以上4°Cは15-20日間保存でき、-70°Cは長期保存でき、繰り返し凍結融解を避ける）

3、サンプル輸送：以下のいずれかの方法でサンプルを送ることができる

①組織サンプル、細胞サンプルをドライアイスで輸送するか、蛋白保護剤を添加した後に氷嚢を入れて輸送する、

②細胞サンプルは培養瓶に直接速達で送ることもできる（密封して汚染しないことを保証し、培養液が漏れないことを保証し、細胞は成長しすぎないで、50%ぐらい、培養液をいっぱいにしてください）、

③血清または上澄み液を直接氷嚢に入れて送る（密封して液体が漏れないことを保証し、道のりによって2-3日近く遠く着くことができる）。

実験代行サービス：