NLucルシフェラーゼ検出キット

NLucルシフェラーゼは遺伝子工学的に改造された小分子酵素（19.1 kDa）であり、性能zhuo越の生物発光報告遺伝子タンパク質である。それは蛍（Photinus pyralis）や海腎蛍光体酵素より約150倍明るく、新型の腔腸素類似体（Furimazine）を用いて高強度、グロー型発光信号を生成することができる。この発光反応はATPに依存せず、同時に下地発光信号を抑制することで最高の検出感度を得る。
NLuc Reporter Gene Assay Kitは、NLucルシフェラーゼが存在する場合に強い信号を生成する感度の高い簡単で単回添加可能な試薬を提供します。
製品構成要素：

1、自己準備材料：
PBS；マルチショットガン白色不透光/黒色細胞培養プレート、
2、検査前準備：
（1）予めNLuc検出基質（50×）とNLuc検出基質緩衝液を室温に置いておく。
（2）実際の使用量に基づいて、適量のNLuc検出基質（50×）とNLuc検出基質緩衝液を1：50の割合で混合し、室温で光を避けて予備する。例えば、反応液が10 mL必要な場合は、0.2 mLの検出基質を添加する必要がある。
注：現在配合して使用することを提案し、残りの新型基質を含む反応液は今回の実験が終わった後に保存することを提案しない。
3、操作方法：
（1）細胞培養箱から細胞培養プレートを取り出し、5〜15分間放置し、室温に戻した。
注：白色不透過または黒色の細胞培養プレートを使用して、孔間の信号干渉を低減します。
（2）検査溶液の添加
例えば、96ウェルプレートは通常80〜100μLの培養液を添加し、それに応じて80μL−100μLの検出溶液を添加する、384ウェルプレートは通常、20〜30μLの培養液を添加し、それに応じて20〜30μLの検出溶液を添加する。
（3）発光検出
均質化後、化学発光器または酵素スケール器においてNLucルシフェラーゼの遺伝子活性を検出した。
注：最適な検査結果を得るために、検査試薬を入れてから1時間以内に検査を完了してください。
4、分析データ：
（1）実験設計：異なる実験目的に応じて、各培養プレートに対照群、実験群と空白対照群を設置すべきである。実験の正確性を保証するために、理論的には各実験群（対照群を含む）は空白対照群の蛍蛍光酵素の発光測定値を減算しなければならない。
①空白対照群：

注：ブランク対照群の試料量は実験試料量と同じでなければならず、実験試料と同じ培地/血清の組み合わせを含み、そしてwanを加えてすべて同じ検出試薬でなければならない。
②実験群：トランスフェクション細胞を実験化合物で処理した（すなわち実験群F）。
③対照群：トランスフェクション細胞は処理せず、標準化結果（すなわち対照群F）として用いた。
（2）計算結果：
実験群＝実験群F−背景F。

発現倍数=実験群/対照群。

-20℃で保存し、有効期間は1年間。NLuc検査基質（50×）は分装−80℃で保存することを提案した。

1、酵素反応は温度に対して比較的に敏感で、添加検査の前に必ずすべての試薬を室温（20-25℃）に平衡させてから使用する。
2、検査には白または黒の96穴プレートを使用する必要があります。通常の透明な96ウェルプレートを使用すると、隣接するウェル間に相互干渉が発生します。
3、測定機器：化学発光を測定できる機器はすべて適用できるが、異なる機器の設置と感度が異なるため、測定した光信号値も異なる、
4、単管蛍光測定器による測定、各サンプルと測定試薬を混合してから測定前までの時間は一致しなければならない、
5、あなた自身の安全のために、実験前に有効な防護をしてください。