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概要

CTF−LTM 2 D蛍光細胞活性検出キットは、細胞プロテアーゼによるポリペプチド生成物の分解に基づいて蛍光信号を生成する。細胞膜の完全性が損なわれると、このプロテアーゼは基質の分解活性を失ってしまう。

製品詳細

CTF-LTM 2 D蛍光細胞の活力検出キット

製品説明
記述
細胞活性検出には、染料排除、ATP濃度変化、酵素活性変化などの様々な方法がある。細胞検出は時に細胞毒性のメカニズム研究及び/又は内参対照の設立を必要とし、それにより多重(multiplex)分析需要を発生し、即ち同一サンプルに対して多種の分析方法で検出し、互いに検出メカニズムが異なり、互いに干渉しない、このように相関比較を行うことができ、それにより細胞毒性のメカニズムを明らかにし、或いはシステムの違いを排除することができる。海外のCellTiter Fluor(CTF)クラスの製品は、このような原理に基づいて設計されています。当社は独自に同類の蛍光細胞活力測定キット(Fluorescent Cell Viability Assay Kit)を開発し、性能面では海外ブランド品と明らかな差はなかった。本製品は生きた細胞内のプロテアーゼによるポリペプチド−蛍光基基質生成物の分解に基づいて、蛍光信号を生成する。細胞膜の完全性が損なわれると、このプロテアーゼは基質の分解活性を失い、蛍光信号を生成しない。CTF-L商標ルシフェラーゼキットの検出原理と異なり、検出方法も異なり、その検出感度はルシフェラーゼ法に劣るが、より早期の軽微な細胞障害を検出することができ、2つの検出は適合性がよく、multiplex検出を行うことができる。
製品の特徴:
1、性能
検出信号、Window,感度と特異性は海外ブランドの同類製品と類似している。
2.互換性
CTGなどの常用分析試薬と適合し、相互影響を形成しない。
3、特徴
細胞早期膜損傷に対してより敏感である。
4、便利
「添加-混合温育-検査」は、実験手順全体が簡単で操作しやすい。
製品構成:
プロテアーゼ基質、緩衝液を混合した後、10 mL又は100 mLのブラウンボトル及び2 mlチューブに充填し、規格は以下の通り:
仕様 CTF基質 CTF緩衝液 検出可能な96-オリフィスプレートの穴の数 検出可能な384-オリフィスプレートの穴の数
10mL 100マイクロリットル 10mL 100 500
2×50mL 2×500uL 2×50mL 1000 5000
使用方法
1、細胞準備:
(1)96ウェルまたは384ウェル細胞培養プレートに適切な密度の被検細胞を敷設する。黒板を使用することをお勧めします(発光試薬と併用する場合は、白板を選択できます)。
(2)被検化合物を準備する。適切な濃度の被検出化合物を細胞板孔に添加した。培養液中の有機溶媒濃度は1〜2%以下に維持した。未添加化合物の対照群を設定した。
2、細胞活力検査:
(1)CTF-Lを取り出す商標細胞活性検出試薬は、CTF緩衝液wanが完全に溶解した後、室温まで平衡した。CTF基質渦振動によりche底が均一になり、CTF基質を瞬時に遠心分離して管底に収集する。

(3)測定対象細胞培養プレートを取り出し、各ウェルに等体積のCTF反応液、例えば100μl培養液を100μl 1 x CTF反応液に添加する。
(4)低速振動板を20秒間混合し、遮光37℃で60 min反応した後に蛍光検査を行う。CTF基質に対する細胞の切断速度によって異なり、最適なリードタイムは細胞に応じて最適化される必要がある。最速では試薬を入れてから30分後に読取り板を行うことができる。一般的には、ボードを60分以上後に読み込むと、信号対雑音比が高くなります。リードボード時間は最長3 hrを超えないことをお勧めします。
(5)蛍光読取板計上で蛍光信号を読み取り、励起光Ex 380−400 nm、発光光Em 505 nm。
(6)必要に応じて、Caspases 3/7細胞アポトーシス検出などの下流の多重分析を継続する。
注意事項
1、初めて使用した後、基質を-20℃に分けて保存することを提案し、毎回新鮮に反応液を調製する。
基本情報
保存/保存方法
-20℃以下の遮光貯蔵、有効期間12ヶ月。
実験結果図
5000細胞/ウェルのHela細胞を96ウェルホワイトプレート透明底培養プレートに播種し、異なる濃度のポリシジリ杉アルコールを加えて処理した。65時間後に取り出し、60 ul medium-60 ul蛍光検出試薬-60 ul CTG検出試薬を用いた逐次蛍光細胞活力検出-CTG細胞活力検出を行った。未薬物処理の反応孔示度を100%として、薬物処理孔percent readingを計算し、IC 50.左図と右図を求めて、それぞれ国外の同類ブランド製品とCTF-Lである商標の蛍光検出結果は、2つの検出方法IC 50が同等であった。
HEK 293細胞を計数し、96ウェルプレートに分け、1ウェル当たりの細胞数を表に示す。製品説明書別にCTF-Lを使用商標2 D蛍光細胞活性検査キット及び海外同類ブランドPC製品は蛍光細胞活性検査を行い、図中の示度は60分間の示度を繰り返す2つの平均を表す。結果は、2つのキットの検出感度が類似していることを示した。
A 549は白色と黒色の透明細胞板、1ウェル当たり1.5 e+04細胞、100μL培地にそれぞれ接種された。24 hr後に化合物STSP(Staurosporine)を添加し、最高濃度1μM、3 x希釈、8濃度、溶媒DMSO最終濃度1%、24 hr後に検査を行った:黒色板はCTF蛍光細胞の活力検査に用い、CTF-L商標2 D蛍光細胞活力検出キットの説明書を行い、試薬を添加後、60 min/100 min/120 min Ex 380/Em 505読取り板、白色板を細胞活力CTG検査に用い、CTG-L商標2 D細胞活性検査キットの説明書を行い、試薬10 min/30 min/60 minを添加した後、板の線量曲線を上図を見た:愛必信CTGとCTFの2種類の方法によりA 549細胞EC 50に対してSTSPを測定した。
CTF-LTM 2 D蛍光細胞の活力検出キットご注意:本製品は科学研究実験に使用するだけで、臨床などの研究をサポートしていない