EV-Save™細胞外嚢胞保存安定剤（TFF用）

EV Save™細胞外嚢胞保存安定剤（TFF用）

接線流ろ過法（TFF）は効率的な方法として細胞外嚢胞（EV）濃縮と緩衝液置換に用いられる。TFFは、試料をろ過膜と平行に流動させることにより、試料のろ過膜への堆積を防止し、試料損失をできるだけ低減する。また、EVなどの吸着しやすいサンプルは、膜吸着やろ過操作における物理的応力により、回収率が低下する可能性がある。

EV-Save™ 細胞外嚢胞保存安定剤（TFF用）は、TFF処理中の物理的応力及び膜の吸着を軽減することによりEV回収率を向上させることを目的としている。本製品を使用することで、効率的で安定したEV回収を実現することができます。

◆特徴

●TFFを用いたEV精製、濃縮、緩衝液置換過程におけるEV損傷の抑制とEVによるろ過膜の吸着

●操作が簡単で、サンプルに本製品と平衡緩衝液を添加するだけである

●

（注：緩衝液交換中に本製品を添加してのみこの効果を達成することができる）

◆推奨サンプル

●精製EV

●細胞培養上清

血清、血漿、干渉物質の含有量が高いサンプルでは、抗吸着効果が低下する可能性がある

◆推奨TFFモジュール

MicroKros mPES 100 kDa（Repligen、メーカー番号：C 02-E 100-05-N）

次のモジュールが使用できることを確認しました。★QADB 610★★QADB 610★★QADB 610★★QADB 610★QADB 610★★QADB 610★QADB 610★★QADB 610★★QADB 610★★QADB 610★★QADB

●Pellicon XL UF Mod Biomax 100 kD 0.005m2 (Millipore)

●12インチ100 kD 0.5 mm（Sartorius）

次のモジュールは使用できません。

●オメガ膜ミニTFFカプセル-100 K（Cytiva）

●TFF易切流ろ過電気自動車濃縮器（HansaBio）

◆データ

パフォーマンスデータ

▼緩衝液置換中に精製したEVの回収率を高める

MassivEVを使用する™ EV Purification Column PS（品番：131-19491）は骨髄由来間葉系幹細胞（BMMSC）と脂肪組織由来間葉系幹細胞（ADMSC）の細胞培養上清からEVを精製した。その後、RepligenのTFFシステムを用いて、本製品の1/100量を添加したHBS緩衝液を交換して緩衝液交換を行った。PSキャプチャーの使用™ 外分泌体ELISAキット（ストレプトアビジンHRP）（品番：298-80601、検出抗体は抗CD 63または抗CD 81抗体を使用）、緩衝液置換後のEV回収率を評価した。，EV粒子粒径分布はNanoparticle Tracking Analysis（NTA）を用いて測定した。

（1）酵素結合免疫吸着試験

【結果】

本製品を添加することにより、TFF置換緩衝液によるEVの回収率の上昇が観察された。

（2） NTA

【結果】

本製品添加後、精製EV粒子の粒径分布に顕著な変化は認められなかった。

TFFを用いて細胞培養上清を20倍濃縮し、その後100倍の緩衝液で置換した。本品を細胞培養上清と置換緩衝液に1/100量添加した。CD 63とCD 81のELISAキットを用いてEVの回収率を検出し、Nanoparticle Tracking Analysis（NTA）を用いてEV粒子粒径分布を検出した。

(1) ELISA

【結果】

本製品を添加することにより、細胞上清からのEV精製の回収率が向上することが観察された。

（2） NTA

【結果】

本製品添加後、EVの粒子径分布に顕著な変化は認められなかった。

▼精製されたEV吸着抑制と冷凍保護効果

（1）吸着抑制効果

それぞれEV-Save™ ™ 細胞外嚢胞保存安定剤（TFF用）（以下、「本製品」と記す）を精製EV溶液に1／100量添加した。その後マイクロチューブに移行し、48時間保存した。CD 63とCD 81のELISAキットを用いてEVの含有量を検出した。

（2）冷凍保護効果

TFFを用いて、骨髄由来間葉性幹細胞（BMMSC）の培養上清からEVを精製した。本製品を精製EV溶液に1/100量添加した後、3回凍結融解（−20℃〜室温）した。CD 63とCD 81のELISAキットを用いて凍結融解前後のEV含有量を検出した。

【結果】

本製品は吸着抑制効果と冷凍保護効果があり、EV保存の理想的な選択である。

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ポリマー修飾とは、シリカゲルのODS化時に多官能シリル化剤が相互重合したり、単一種シリル化剤がシリカゲルと複数箇所結合して高密度オクタデシル基層を形成する構造を指す。

＜ポリマー修飾＞

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更新日時：2025/8/18

先週を振り返って：2025/8/11