Firefly & Renilla Assay Kit（デュアルシフェラーゼ報告遺伝子検出キット）は遺伝子の発現量を検出するために有効な手段を提供し、DLR検出において、ホタルルシフェラーゼ（Firefly luciferase）と海腎ルシフェラーゼ（Renilla luciferase）の活性は単一サンプルで順次検出することができる。まず蛍光体（Luciferin）を基質として蛍蛍光体酵素の活性を測定し、それから蛍蛍光体酵素の触媒を抑制する物質を添加し、同時に腔腸素（Coelenterazine）を添加して海腎蛍光体酵素の活性を測定し、双蛍光体酵素報告遺伝子検査を実現した。ルシフェラーゼとその基質という生物発光系により、遺伝子の発現を非常に敏感で効率的に検出することができる。通常、関心のある遺伝子の転写制御素子または5'プロモーター領域をLuciferaseの上流にクローニングするか、3'-UTR領域をLuciferaseの下流にクローニングし、レポーター遺伝子（Reporter gene）プラスミドに構築し、その後細胞にトランスフェクションし、適切な薬物などで細胞を処理した後に細胞を分解し、ルシフェラーゼ活性の高さを検出することにより薬物処理などの目的の遺伝子に対する転写制御作用を判断する。海腎ルシフェラーゼは、細胞数とトランスフェクション効率の差を解消するためにトランスフェクション効率を検出するための内参としてより多く用いられている。
蛍蛍光体酵素は分子量が約61 kDのタンパク質であり、ATP、マグネシウムイオン、酸素の存在下で蛍光体を触媒して酸化蛍光体（Oxyluciferin）を生成し、蛍光体が酸化される過程で光信号を生成することができる。本キットの光信号は、化学発光器、酵素スケール、またはフラッシュ測定器により測定することができる。このキットは検出が迅速で、感度が高く、検出範囲が広く、細胞内因性活性妨害がないなどの特徴がある。
製品特徴：
迅速：細胞分解は10〜15 min以内に完了した。
便利：試薬は調製しやすく、サンプル検査手順は簡単である。
感度：zui低10検出可能-20molのルシフェラーゼ。
酵素の濃度は線形範囲で8桁に達することができる。
製品構成要素：

1、細胞分解
（1）培地を除去し、PBSを加えて軽く2回洗浄する（壁貼り細胞は直接この操作を行うことができ、懸濁細胞は遠心分離して細胞を収集する必要がある）。以下の方法で1×Lysis Buffer（無菌水で4：1希釈成分A）を添加し、その後培養プレートをマイクロ発振器上に室温で15分間振動させ、細胞を十分に分解した。
注：分解生成物は室温で6 h保存でき、−70℃で長期保存できる（分解生成物は繰り返し凍結融解できない）。
（2）分解物を10000-15000 rpmで3-5 min遠心分離し、遠心分離後に上清を新しいEP管に移して後続検査を行う。
注：細胞分解後すぐに検査することができ、凍結保存することもでき、必要な時に再検査することができる。凍結保存サンプルは室温まで融解してから検査を行う必要がある。
2、作動液の調製
（1）全成分を室温に戻す。

注：蛍蛍光酵素作動液は繰り返し凍結融解することができず、単回実験の使用量が少ない場合は、単回使用量によって小規格に分けることを提案する。
（3）成分Eを成分Dで海腎ルシフェラーゼ作動液に希釈し、希釈方法は1 ul E成分を49µL D成分に添加した。
注：海腎蛍光酵素作動液は現在使用して配合する必要がある。
3、化学発光値の検出
（1）計器の取扱説明書に従って化学発光を検出する機能を有する計器、例えば多機能酵素スケールを開き、パラメータを設定し、測定時間は10 s、測定間隔は2 sである。
（2）各サンプル測定時に、サンプル20-100 ulを採取する（サンプル量が十分であれば100 ulを添加し、サンプル量が不足すれば適切に使用量を減らすことができるが、検出孔の使用量は一致している必要がある）。1×Lysis Bufferは空白対照である。
（3）100 ulホタル蛍光酵素検出液を添加し、RLU（relative light unit）値を測定する（酵素標準器にShaking混和機能を設置することを提案する）。
注：この発光は瞬時発光であるため、蛍蛍光酵素作動液を添加した後、直ちに検査を行うことを提案する。

（5）海腎ルシフェラーゼを内参とする場合、ホタルルシフェラーゼ測定で得られたRLU値を海腎ルシフェラーゼ測定で除したRLU値。得られた比に基づいて、異なるサンプル間の目的報告遺伝子の活性化の程度を比較した。ホタル蛍光酵素を内参とすれば、同様の計算も可能である。

-20℃で保存します。C成分はあらかじめ無菌水を用いて2 mg/mLの貯液、B成分、D成分及び貯液として配置されたC成分を使用することを提案し、
実験需要に応じて小ロット分装を行う。すべての検査作動液は繰り返し凍結融解しないように、現在使用することを提案した。

ルシフェラーゼ報告遺伝子検出キット、デュアルシフェラーゼ報告遺伝子検出キット