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アドレス
北京市海淀区中関村ソフトウェアパーク8号華夏科学技術ビル307
北京ランボーリード商業貿易有限公司
概要
trizol pal核酸抽出装置クロロホルム試薬はRNA抽出に用いられる。trizol pal（クロロホルム置換試薬）はTrizol Reagent（商品番号：R 1000）と組み合わせて使用することができ、クロロホルムの代わりに、分解系を繰り返し抽出して蛋白質を除去することができ、用途が広く、動物組織、植物材料、各種微生物及び培養細胞などのサンプルから総RNAを抽出することができる。試料はTrizol中で十分に分解されながらRNAの完全性を最大限に保証することができる。
製品詳細
RNA抽出のためのトリゾルパルクロロホルム試薬品番：R 1200
保存条件：0-30℃遮光保存
RNA抽出のためのトリゾルパルクロロホルム試薬製品の説明：
Trizol PALはTrizol Reagent（商品番号：R 1000）と組み合わせて使用することができ、クロロホルムの代わりに、分解系を繰り返し抽出して蛋白質を除去することができ、用途が広く、動物組織、植物材料、各種微生物及び培養細胞などのサンプルから総RNAを抽出することができる。試料はTrizol中で十分に分解されながらRNAの完全性を最大限に保証することができる。Trizol PAL遠心分離を加えると、溶液は3つの層に分かれます：上層の無色水相、中間層と下層の赤色有機相、RNAは上清層に分布します。上澄み層を収集した後、イソプロパノール沈殿により全RNAを回収することができる。抽出された総RNAは完全性が良く、蛋白質とDNA汚染がなく、各種分子生物学の通常の実験に用いることができ、例えばRT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、
じこしやく
Trizol Reagent（品番：R 1000）、イソプロパノール、75%エタノール、RNaseフリーの水（新規開封またはRNA抽出専用）
核酸抽出装置注意事項：
1、RNase汚染を予防するには、以下のいくつかの方面に注意しなければならない：
1）交差汚染を避けるために、RNaseのないプラスチック製品と銃ヘッドを使用する。
2）ガラス容器は使用前に180℃の高温で4時間乾燥焼かなければならず、プラスチック容器は0.5 MNaOHに10分間浸漬し、水chediで洗浄した後、高圧滅菌することができる。
3）調製溶液はRNaseのない水を使用すること。
4）作業者は使い捨てマスクと手袋を着用し、実験中は手袋をこまめに交換する。
3、本製品を使用する時、手袋、眼帯、マスクなどの防護物品を着用しなければならない。うっかり目に触れた場合は、すぐに大量の水で洗い流し、病院に行って治療しなければならない。火種、熱源から離れて使用する。
3、75%エタノール中に保存されたRNA沈殿物は、2〜8℃で1週間保存でき、−20℃で1年間保存できる。
4、RNA半減期は比較的に短く、分解しやすいので、抽出後、できるだけ早く後続の実験を行うことを提案し、例えばcDNA、Northern Blotなどに逆転写する。
5、下流実験がDNAに非常に敏感であれば、RNAをRNaseを含まないDNase Iで処理することを提案する。
操作手順：
1、各種材料の処理.
1.1植物組織：新鮮な植物組織を採取して液体窒素中で十分に研磨するか、植物グループzhiを切断した後、直接Trizol中で迅速に研磨し、30-50 mg組織ごとに1 mL Trizolを添加し、混合する。
注：サンプル体積は一般的にTrizol体積の10%を超えてはならない。
1.2動物組織：新鮮または-70℃で凍結保存した動物組織をできるだけ切断し、30-50 mg組織ごとに1 mL Trizolを添加し、ホモジナイザでホモジナイズ処理を行う。または液体窒素中で研磨した後、Trizol 1 mLを加えてよく混ぜる。
1.3単層培養細胞：培養液を吸引し、直接培養板に適量のTrizol（10 cm 2面積当たり1 mLのTrizolが必要）を添加し、サンプラーで繰り返し吹き付けて細胞を分解させることができる。膵卵bai酵素で処理した後、細胞溶液をRNase-Freeの遠心管に移し、300×gで5分間遠心分離し、細胞沈殿を収集し、すべての上清を丁寧に吸引し、Trizol 1 mLを加えて混合した。
注：1）収集細胞数は1×107を超えないこと。
2）TRNzol添加量は培養プレート面積によって決定され、細胞数によって決定されるものではない。トリゾル添加量が不足すると、抽出されたRNAにDNA汚染が生じる可能性がある。
3）細胞を収集する時、必ず細胞培養液をきれいに除去しなければならない。そうしないと、分裂不全を招き、RNAの生産量が低下する。
1.4細胞懸濁液：遠心分離して細胞を収集する。5×106−1×107動物、植物および酵母細胞ごと、または107細菌細胞ごとに1 mLのTrizolを添加した。
注：1）RNAが分解しないように、Trizolに添加する前に細胞を洗浄しないでください。
1.5血液処理：新鮮な血液を直接採取し、3倍体積Trizol（0.25 mL全血に0.75 mL Trizolを添加することを推奨する）を添加し、十分に振動混合する。
1.6任意の手順：タンパク質、脂肪、多糖類または細胞外物質の含有量が高いサンプル、例えば筋肉組織、脂肪組織または植物の塊茎に対して、均質処理後4℃、12000 rpm（~ 3400×g）で10分間遠心分離して不溶物質を除去することができ、この時沈殿中に細胞外物質、多糖類と高分子量のDNAを含み、RNAは上清中に存在する。
2、サンプルにTrizolを添加した後、何回か吹き付けを繰り返し、サンプルを十分に分解させた。室温で5分間放置し、タンパク質核酸複合体を完全にquan分離した。
3、上記溶液にTrizol Palを添加し、1 mLのTrizolを使用して0.2 mLのTrizol Palを添加し、管蓋をしっかりと閉め、15秒間激しく振動し、室温で2-3分間放置する。
4、4℃12000 rpmで15分間遠心分離し、この時サンプルは3層に分けた：赤色有機相、中間層と上層の無色水相、RNAは主に水相の中で、水相（約600μL）を1つの新しいRNase-Free遠心管（自己準備）に移した。
5、得られた水相溶液に等体積イソプロパノールを加え、逆さまに混合し、室温で10分間放置した。
6、4℃12000 rpmで10分間遠心分離し、上清を廃棄した。
7、75%エタノール（RNaseを含まない水で調製）を加えて沈殿物を洗浄する。
8、4℃12000 rpmで3分間遠心分離し、上清を慎重に吸引・廃棄し、RNA沈殿物を吸引・廃棄しないように注意する。
注：残りの少量の液体は一時的に遠心分離することができ、それから銃の頭で吸い出し、沈殿物を吸い捨てないように注意する。
9、室温で2 ~ 3分放置し、乾かす。30〜100μLのRNaseフリーの水を加え、RNAを十分に溶解し、得られたRNAは−70℃に保存し、分解を防止した。
注：沈殿物は溶けにくいように乾燥しすぎないでください。
