トランスフェクション級線形ポリエチレンイミン（MW 25000）

トランスフェクション級線形ポリエチレンイミン（MW25000）はポリエチレンイミンに基づく瞬時トランスフェクション試薬製品であり、高いトランスフェクション効果を有する。ポリエチレンイミンは高陽イオン電荷を有する有機高分子ポリマーであり、負電荷を有する核酸分子を結合しやすく、正電荷を有する複合体を形成する。この複合体は細胞表面アニオンと結合し、内呑み込み作用により細胞に入る。このトランスフェクション試薬は細胞毒性が低く、多種の細胞系に適しており、すでに組換え蛋白、アデノウイルスなどの生産を行う。

1. しやくはいち

必要な材料：

脱イオン水またはそれ以上の生物級水、12モル/リットル塩酸（えんさん）、10モル/リットル*（水酸化ナトリウム)、使い捨て0.1~0.2μm PES真空無菌フィルター、無菌高密度ポリエチレンまたはポリプロピレン貯蔵瓶。

貯蔵液の配置：

⑴ 将（しょう）1グラムトランスファグレード線形ポリエチレンイミン25,000に溶解900ミリリットル脱イオン水の中で、攪拌しながら（加熱してから60-80℃）エッジ滴下12メートル塩酸、調整pH値＜2.0、撹拌3時間以上溶解するまで、

⑵ 用いる10メートル*調整pH値まで6.9~7.1；

⑶ 溶液をメスシリンダ（またはメスカップ）に移す水を加える許容範囲1 L；

⑷ 使い捨て0.2µmフィルターを真空ろ過除菌すると、1ミリグラム/ミリリットルの貯蔵液、

⑸ 必要に応じて貯留液を分注し、-20℃保存可能1年、貯蔵液が再溶融した後、再凍結保存することはできない。

2. トランスフェクション操作フロー

接種細胞：トランスフェクション効率を高めるため、トランスフェクション前日に細胞を接種し、トランスフェクション時の細胞密度に70~80%に適している；

準備デオキシリボ核酸-トランスフェクション試薬複合体：

⑴ 将（しょう）デオキシリボ核酸、トランスフェクション試薬と希釈剤は先に室温に回復し、

⑵ 適切な無タンパク培地で適量を希釈するデオキシリボ核酸；

⑶ 一定の割合で（毎1μg DNA必要1-5μL試薬をトランスフェクションし、自分で配合比を模索することを提案）希釈後のトランスフェクション試薬を装着するまで滴下するデオキシリボ核酸溶液の試験管（追加順序を逆にしない）を選択し、そっと渦巻き、十分に混ぜる、室温静置10~25分インキュベーション。

トランスフェクション細胞：

⑴ 無血清条件下でトランスフェクションする場合、細胞培地を除去し、無血清培地に置換する、

⑵ 細胞に適量を加えるデオキシリボ核酸-トランスフェクション試薬ふくごうたい、軽く混ぜる、トランスフェクション6-8時間後、新鮮に予熱した培地を交換する；

⑶ に37℃、5%一酸化炭素₂培養箱中培養、トランスフェクション後24時間転入遺伝子の発現を検出することができる（適切な検出時間を自己決定することができる）。

輸送及び貯蔵条件

輸送条件：室温輸送

保存条件：粉末は室温または4℃保存、有効期間2年です。

注意事項

1. ほとんどの細胞に対して1μg DNA使用する3μLトランスフェクション試薬は高いトランスフェクション効率を得ることができ、また、1μg DNA使用する1.5~4μLトランスフェクション試薬を最適化する。

2. 安全と健康のために、実験服を着て使い捨て手袋を着用して操作してください。

3. 本製品は科学研究用にのみ使用されている。