植物トレハロース-6-リン酸（T 6 P）ELISAキット

　　植物トレハロース-6-リン酸（T 6 P）ELISAキット取扱説明書

BS-8050-A植物トレハロース-6-リン酸（T 6 P）ELISAキット96 T

BS-8050-B植物トレハロース-6-リン酸（T 6 P）ELISAキット48 T

一、実験原理

本キットは、二抗体サンドイッチ法による酵素結合免疫吸着試験（ELISA）を用いて植物組織または細胞中のT 6 Pレベルを検出した。ミクロ多孔質プレートは抗T 6 P抗体をプリパックし、サンプル中のT 6 Pと固相抗体を結合した後、ワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識の二抗形成複合体を添加した。基質TMBを添加して発色し、TMBはHRP触媒下で青色に転化し、酸終止後に黄色になり、発色深さはサンプル中のT 6 P濃度と正の相関を示し、450 nm波長で吸光度計算濃度を測定した。

成分仕様保存条件

プリパックは微孔板12孔×8条2−8℃で密封乾燥されている

標準品凍結乾燥粉-20℃再溶解後分注

HRP標識検出抗体液体遮光2−8℃

発色基質（TMB）A液＋B液は現在使用して配合し、光を避ける

終止液2 M硫酸室温

濃縮洗浄液液体40℃水浴溶解結晶

サンプルxishi液体安定剤含有

注：異なるブランド成分に差がある可能性があり、詳細は具体的な説明書を参照してください。

1.サンプルタイプ

植物組織：組織0.1 gを秤量し、1 mL抽出液氷浴均質液を加え、遠心分離して上澄みを取る。

細胞/細菌鄒：遠心分離を収集した後、上清を捨て、超音波破砕細胞から上清を抽出する。

2.保存条件

短期：2-8℃で≦48時間保存する。

長期鄒：分装後-20℃で凍結保存し、繰り返し凍結融解を避ける。

3.希釈提案

通常試料8204：5〜20倍希釈することを推奨する（例えば、20μL試料＋180μL希釈液を採取する）。

高濃度サンプル：事前実験により希釈倍数を確定し、最高100000倍希釈する（三段階希釈法）。

標準品の調製

凍結乾燥標準品に希釈液1 mLを加えて再溶解し、混合後10分間静置した。

シリーズ希釈（例えば8 pmol/L→4 pmol/L→…→0.5 pmol/L）を行う。

サンプルを加える

標準穴：50μL/穴。

サンプルホール：まず40μL希釈液を加え、さらに10μLサンプル（総希釈5倍）を加える。

ブランクホール：サンプル及び二次抵抗を加えない。

インキュベーション

発色と終了

各ウェルにTMB発色液を100μL添加し、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

停止液50μLを加えて反応を停止し、30分以内にOD値を測定した。

五、注意事項

試料回避：アジドナトリウム（NaN 3）含有試料（HRP活性抑制）鄒。

試薬平衡：前室温平衡を20分間使用し、洗浄液を濃縮するには40℃の水浴で結晶を溶解する必要がある。

品質管理：複素穴を設置することを提案し、標準曲線R²は≧0.95でなければならない。

六、結果分析

標準曲線：濃度に対してOD値で4パラメータ方程式を描画する。

注：以上は参考に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。

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