ヒトグルカゴン様ペプチド1（GLP-1）ELISAキット

　　ヒトグルカゴン様ペプチド1（GLP-1）ELISAキット取扱説明書

BS-0203-Aヒトグルカゴン様ペプチド1（GLP-1）ELISAキット96 T

BS-0203-Bヒトグルカゴン様ペプチド1（GLP-1）ELISAキット48 T

一、実験原理

本キットは二重抗体サンドイッチ法を用いてヒト血清、血漿または細胞培養上清中のGLP-1レベルを測定した。

固相抗体パックは、抗GLP−1モノクローナル抗体を微多孔質プレートによってプリパック精製される。

抗原-抗体結合鄒：試料中のGLP-1は固相抗体と結合し、さらにワサビペルオキシダーゼ（HRP）標識の二抗形成複合体を添加した。

発色反応：基質TMBを添加して発色し、酸終了後450 nm波長で吸光度を測定し、濃度は発色深さに比例する。

二、キット組成

コンポーネント仕様コメント

プリパック被微孔板12孔×8条抗GLP−1抗体含有

標準品0.5 ml/瓶凍結乾燥粉、再溶解が必要

HRPマーキング2抗6 ml遮光保存

発色基質（TMB）A液6 ml+B液6 ml現用現用配合

終止液6 ml 2 M硫酸（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫酸）（硫

濃縮洗浄液20 mlは1：20希釈

サンプルxishi液6 ml安定剤含有

注：異なるブランド成分に差がある可能性があり、詳細は具体的な説明書を参照してください。

三、サンプル処理

1.サンプルタイプ

血清/血漿アミド：EDTAまたはヘパリンが抗凝固し、遠心分離して上清を取る。

細胞上清：1000×gで20分間遠心分離して不純物を除去した。

組織均質化：分解後遠心分離して上澄みを取る。

2.保存条件

短期：2-8℃で≦48時間保存する。

長期鄒：分装後-20℃或いは-80℃で凍結保存し、繰り返し凍結融解を避ける。

3.希釈提案

通常試料8204：5〜20倍希釈することを推奨する（例えば、20μL試料＋180μL希釈液を採取する）。

高濃度サンプル：事前実験により希釈倍数を確定し、最高100000倍希釈する（三段階希釈法）。

四、操作手順

標準品の調製

凍結乾燥標準品に希釈液1 mLを加えて再溶解し、混合後10分間静置した。

シリーズ希釈（例えば8 pmol/L→4 pmol/L→…→0.5 pmol/L）を行う。

サンプルを加える

標準穴：50μL/穴。

サンプルホール：まず40μL希釈液を加え、さらに10μLサンプル（総希釈5倍）を加える。

ブランクホール：サンプル及び二次抵抗を加えない。

インキュベーション

37℃で120分間インキュベートし、プレートを3回洗浄した（毎回1分間浸漬した）。

発色と終了

各ウェルにTMB発色液を100μL添加し、37℃で15分間光を避けてインキュベートした。

停止液50μLを加えて反応を停止し、30分以内にOD値を測定した。

五、注意事項

試料回避：溶血、高脂肪試料及びNaN 3含有試料（HRP活性抑制）。

試薬平衡：前室温平衡を20分間使用し、洗浄液を濃縮するには40℃の水浴で結晶を溶解する必要がある。

品質管理：複素穴を設置することを提案し、標準曲線R²は≧0.95でなければならない。

六、結果分析

標準曲線：濃度に対してOD値で4パラメータ方程式を描画する。

注：以上は参考に供するだけで、実際のデータとしてではなく、実験は厳格に説明に従ったり、技術教師に相談したりしなければならない。

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