モジュラス生物肝内胆管癌系器官培地セット

ヒト肝内胆管癌器官キット

ヒト肝内胆管癌系器官培地セット

1、 製品説明

モジュラス生物のヒト肝内胆管癌類器官培地セット（ヒト肝内胆管癌器官キット）はヒト肝内胆管癌器官の確立と維持のための化学的に定義された細胞培地である。患者由来の腫瘍類器官は原始腫瘍のゲノムと病理特徴を概括しているため、医学研究と正確な医学において大きな将来性がある。

2、 製品情報

3、 その他の自己準備材料と試薬

4、 ヒト肝内胆管癌系器官培地の調製

無菌操作技術を用いて肝内胆管癌類器官培地を調製した。以下は調製10mL培地の例は、必要量が異なる場合には、それに応じて使用量を調整することができる。

1、 氷上解凍肝内胆管癌系器官培養因子B（50倍）肝内胆管癌系器官培養因子C（250倍）。

注意：解凍後、肝内胆管癌類器官培養因子B（50倍）、肝内胆管癌類器官培養因子C（250倍）。別々に分けてから、凍結融解を繰り返しないように保存して使用する。

2、 将（しょう）200マイクロリットル肝内胆管癌系器官培養因子B（50倍），40μL肝内胆管癌系器官培養因子C（250倍）追加＃ツイカ＃9.76mL肝内胆管癌類器官培養基礎培地中、十分に混合し、調製した10mL肝内胆管癌類器官培地。

注意：調製後の肝内胆管癌類器官培地は2-8摂氏度ストックして、2週間以内に使用することをお勧めします。肝内胆管癌系器官培養因子B（50倍）細菌や真菌抗生物質が含まれています。

5、 患者由来の肝内胆管癌系器官の初代培養

注意：主要な人体組織材料に関する研究は、関連するすべての機関と政府法規に従わなければならない。主要な人体組織材料を収集する前に、すべての被験者の同意を得なければならない。

一 初代ヒト肝内胆管癌系器官の確立

1、 原発性肝内胆管癌類組織破片を遠心管を用いて冷たい原発組織貯蔵溶液に集めた。組織サンプルを4℃、分離が始まるまで。

2、 得られた組織断片が上皮で構成されているかどうかを評価する。脂肪や筋肉組織がある場合は、解剖顕微鏡下でナイフやピンセットを使用して、これらの非上皮成分をできるだけ多く除去してください。脂肪や筋肉組織がない場合は、すぐに次のステップに進みます。

3、 上皮類器官基礎培地またはDPBS組織を2回洗浄する。

4、 ナイフを使うか、組織を細かく切る1-3mm³の小さな破片を細胞培養皿に入れた。

5、 に37℃下用10mL腫瘍組織消化液は15mL遠心管中で組織断片を消化し、消化時間は可変であり、30分で着く1.5時間は待たない。消化過程を注意深く監視し、適切にブローアップして消化程度を観察することができる。ほとんどの組織フラグメントが1mLピペットがヘッドを吸引すると、消化プロセスが完了します。

6、 将（しょう）子牛血清組織消化混合物に加え、最終濃度は2%を選択し、100ミクロン細胞フィルタろ過。

7、 収集して4°C以下250グラム遠心ろ過細胞3分です。赤色沈殿が見られる場合には、上清を吸入し、2mL赤血球溶解液の再懸濁沈殿、室温で赤血球を溶解1分、および4°C以下250グラム遠心3分です。

8、 上澄み液を吸引、沈殿物を基礎培地に再懸濁し、4°C以下250グラム遠心3分で、この手順をもう一度繰り返します。

9、 上澄み液を吸引し、沈殿物をマトリックスゲルに再懸濁した。マトリックスゴムは氷の上に保存して凝固を防止しなければならない。できるだけ早くこのプロセスを行います。使用するマトリックスペーストの量は粒子の大きさに依存する。およそ10，000個の細胞は25μLマトリックスゴム中。

10、 マトリックスペーストを過度に希釈しないこと（マトリックスペーストの割合応>70%（マトリックスゴム体積/これにより、固体液滴の正確な形成が抑制される可能性があるため、全体積））。臓器を含むマトリックス接着剤を敷設する24孔細胞培養プレートの底部、各液滴は孔の中心を約30μL。

注意：基質系器官が基質接着剤に再懸濁すると、基質接着剤が試験管またはピペットの吸込頭で凝固する可能性があるため、できるだけ早く種板を行う。基質粒子を管壁に接触させないでください。

11、 培養プレートを入れる37℃和5%一酸化炭素₂の培養箱に15-25分、マトリックスゲルを硬化させた。

12、 必要な量の肝内胆管癌系器官培地を準備する。

13、 マトリックス液滴が凝固すると（15-25分）、プレートを開けて穴ごとに丁寧に入れる500マイクロリットル肝内胆管癌類器官培地。

注意：培地をマトリックスゲル液滴の頂部に直接添加しないでください。これは凝固構造を破壊する可能性があるからです。

14、 培養プレートの配置37℃和5%一酸化炭素₂の恒温培養箱に入れた。

15、 毎に3-4培地を1日1回交換し、細孔から培地を慎重に吸引し、新鮮な予熱された臓器培地で代用した。

16、 類器官の成長状態を密接に監視し、理想的には、肝内胆管癌類器官は7-10日以内に完成する。

b ヒト肝内胆管癌類器官の継代培養

1、 洗浄液で洗浄された銃頭を吹きつけて抽出し、洗浄液で洗浄された臓器と培地の懸濁液を移送する1.5mLEPチューブの中。

2、 潤洗液で潤洗した銃頭で力を入れて類器官懸濁液を再懸濁し、類器官と基質ゲルを分離させた。

3、 250グラム遠心力室温遠心分離3分。

4、 上清を捨て、類器官消化液を使用したり、機械的に破壊したりする。類器官消化液を用いた細胞解離については、類器官消化液中に類器官懸濁液を再懸濁させ、ピペットを上下に繰り返し吹き付けて置く37℃類器官が解離するまでインキュベートする。フィルター付きガンヘッドを使用する2分繰り返し上下に吸引8回、類器官の解離を助ける。消化過程を密接に監視することで、類器官解離液中のインキュベーション時間を最短にする。機械的故障が発生した場合、1.5ミリリットル上皮類器官基礎培地における重懸濁類器官懸濁液。ピペットで系器官懸濁液を慎重に吸い上げ、上下を繰り返す30回、これは消化に役立ちます。

注意：類器官解離液中の解離が超過しないこと7分、これは悪い種類の器官の成長や破壊につながる可能性があるためです。経験的には、小塊細胞の混合物であれば、10-50個の細胞からなる細胞団を消化すれば完成する。

5、 消化が完了したら、1mL上皮類器官基礎培地を1回洗浄し、室温で250グラム遠心3分です。

6、 上清を捨て、適量の基質ゲルを用いて再懸濁類器官を沈殿させ、再懸濁後氷上に置き、再懸濁時間は超えない30秒マトリックス接着剤が早期に凝固しないようにする。

注意：基質接着剤の希釈比率は70%以上により、培養中のマトリックスゲルの構造安定性を保証した。

7、 マトリックス接着剤とクラス器官の混合懸濁液を点入する48オリフィスプレートの底部は正で、懸濁液がオリフィスプレートの側壁に接触しないようにして、各オリフィス15-20uL左右注意：マトリックスゴムの室温凝固を防止するために、このステップはできるだけ早く完成しなければならない。

8、 接種完了後の培養プレートを37℃二酸化炭素恒温培養箱において、インキュベーション15分マトリックスゲルを左右に凝固させる。

9、 肝内胆管癌系器官培地を調製した。

10、 マトリックスゲルが凝固した後、調製されたヒト肝内胆管癌類器官培地を加え、48オリフィスプレートを穴ごとに入れる250マイクロリットル培地。

11、 将（しょう）48オリフィスプレートの配置37℃二酸化炭素培養箱で培養し、類器がさらなる実験を必要とするまで培養した。

V2.0版

更新日時：2025/6/21