インターロイキン−7 ELISA KITは二重抗体サンドイッチELISA法を採用し、血清などのサンプル中のインターロイキン−7を正確に定量することができ、操作が便利で、免疫学などの科学研究分野に広く応用されている。
インターロイキン-7 ELISA KIT
科学研究でよく使われる検査ツールであり、生物サンプル中のインターロイキン-7含有量を定量的に測定するために用いられる。インターロイキン−7はIL−7遺伝子によってコードされる25 kDaサイズの可溶性分泌タンパク質であり、造血因子ファミリーに属し、リンパ球の分化、増殖、生存に重要な役割を果たす。このキットは関連疾患のメカニズム研究、薬物開発などの仕事を助けることができる。
キット組成
酵素ボード：反応のベクターとして抗IL−7抗体にプリパックされた96ウェルまたは48ウェル。
標準品：通常は凍結乾燥品で、普通は2本あります。使用前に標準品希釈液を用いて再溶解し、0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mLなどの異なる濃度勾配に希釈し、標準曲線を描くために使用する。
サンプルxi放出液：高濃度の測定対象サンプルを希釈し、その濃度がキットの有効な検出範囲内であることを確保するために使用する。
酵素標準抗体：つまりHRP標識の抗IL-7抗体は濃縮液であり、使用する時は要求に応じて酵素標識抗体希釈液で希釈する必要がある。
酵素標準抗体希釈液：酵素標準抗体の希釈に特化している。
基質溶液：TMB基質のように、酵素標識抗体中のHRPと反応し、色変化を生じることができる。
せんじょうえき：一般的に濃縮液であり、使用する際には蒸留水または脱イオン水で特定の割合で希釈し、酵素プレートを洗浄し、結合していない物質を除去し、背景干渉を効果的に低減する必要がある。
ていしえき
シーリングフィルム：インキュベーション中に酵素プレートを覆い、液体の蒸発と外部汚染を防止するために使用する。
取扱説明書：キットの使用方法、注意事項、性能指標などを詳しく紹介する。
サンプル要件
血清：血液を採取した後、室温で2時間または4℃で一晩放置し、その後1000×gで20分間遠心分離し、上澄み液を慎重に吸引して予備する。採血には、熱原、内毒素のない使い捨て器材を使用しなければならない。
血漿：抗凝固剤としてエチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ヘパリンなどを用いることができる。サンプル採取後30分以内に、2〜8℃で1000×gで15分間遠心分離し、上清を採取した。
細胞培養上清：細胞培養上清を1000×gで20分間遠心分離し、細胞破片と不純物を除去した後、上清を取り出して検査に用いた。
組織均質：予冷リン酸塩緩衝液（PBS、0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、che底で残留血液を除去する。組織を切断した後、PBSを約1：9（w/v）の割合で加え、氷の上で十分に粉砕した。さらに5000×gで5〜10分間遠心分離し、検査用に上清を取った。
サンプル採取後、短期間で検査を行うと、4℃に保存することができる。長時間保存するには、−20℃または−80℃に置いて凍結保存し、繰り返し凍結融解を避けるためには、溶血サンプルは一般的に検査には適さない。
操作の流れ
準備作業：冷蔵庫からキットを取り出し、30分前に室温に平衡させる。同時に、濃縮洗浄液を所望の割合で蒸留水または脱イオン水で希釈して予備とする。
サンプリング：ブランク穴、標準品穴、サンプル穴を設定します。ブランクホールに試料xi放出液を添加し、標準品ホールに異なる濃度の標準品を添加し、試料ホールに処理した試料を添加し、各ホールの添加量は通常100μLで、軽く混合し、37℃で90分間インキュベートした。
洗濯：温育が終わった後、孔内の液体を捨て、洗浄液で各孔を満たし、1〜2分間浸漬した後に乾燥させ、5回繰り返し洗浄し、che底が未結合物質を洗浄することを確保する。
酵素標的抗体：1ウェル当たり100μL希釈された酵素標準抗体作動液を添加し、37℃で60分間インキュベートした。
さいせんじょう：上記の洗浄工程を繰り返します。
発色：穴ごとに90μLの基質溶液を加え、軽く混ぜ、37℃で光を避けて15〜30分間発色する（実際の発色状況に基づいて判断する必要がある）。
ていしはんのう：1ウェル当たり50μL終止液を添加し、この時溶液の色は青色から黄色に変化した。
よみとり：終端液添加後15分以内に酵素スケールを用いて450 nm波長で各孔の吸光度（OD値）を測定した。
計算結果：標準品濃度を横座標、OD値を縦座標とし、標準曲線を描画する。サンプルのOD値に基づいて標準曲線から対応する濃度を検出し、サンプルが希釈されている場合は、対応する希釈倍数を乗算して実際の濃度を得る必要があります。
パフォーマンス指標
検出範囲：異なるキットに差異があり、よく見られる検査範囲は15.6-1000 pg/mLなどの区間であり、多種のサンプル中のIL-7含有量の検査要求を満たすことができる。
感度：一般的に7.8 pg/mL以下まで下げることができ、サンプル中の微量のIL-7を検出することができる。
特異性：IL-7に対して高度な特異性があり、他のサイトカインなどの物質とほとんど交差反応がない。
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くりかえしせい：板内変異係数は一般的に10%未満、板間変異係数は15%未満であり、検査結果の安定性と信頼性を保証した。
