インターロイキン−6受容体ELISA KITは、双抗サンドイッチELISA技術を用いて、血清などのサンプル中のインターロイキン−6受容体を正確に定量することができ、操作が便利で、科学研究を助けることができる。
インターロイキン-6受容体ELISA KIT
インターロイキン-6受容体ELISA KIT科学研究において生物サンプル中のインターロイキン−6受容体含有量を定量的に測定するためのツールである。IL-6 Rは免疫調節、炎症反応過程において重要な役割を果たし、その含有量を測定することは関連研究にとって重要な意義がある。
けんしゅつげんり：キットは二抗体サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法を用いることが多い。IL−6 Rに対する特異的抗体を酵素プレート上にプリパックした。サンプルを添加した後、サンプル中のIL−6 Rは固相抗体と特異的に結合した。次いで、酵素標識された抗IL−6 R抗体を加え、これは固相抗体に結合されたIL−6 Rと「固相抗体−IL−6 R−酵素標識抗体」複合体を形成する。十分な洗浄を経て未結合物質を除去し、TMBなどの基質溶液を添加し、酵素の触媒下で基質は発色反応を起こし、色の濃淡はサンプル中のIL-6 Rの含有量に比例する。酵素スケールを用いて特定の波長（一般に450 nm）で吸光度を測定し、標準曲線と比較して、サンプル中のIL-6 Rの濃度を算出した。
キット組成
酵素ボード：96ウェルまたは48ウェル、抗IL-6 R抗体にプリパックされ、反応が起こる担体である。
標準品：普通は凍結乾燥品で、2本あります。使用前に標準品希釈液を再溶解し、0、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mLなどの異なる濃度勾配に希釈し、標準曲線を描くために使用する必要がある。
サンプルxi放出液：高濃度の測定対象サンプルを希釈し、サンプル濃度がキット検出範囲内であることを確保するために使用する。
酵素標準抗体：つまりHRP標識の抗IL-6 R抗体は濃縮液であり、使用する時は要求に応じて酵素標識抗体希釈液で希釈する必要がある。
酵素標準抗体xi放出液：酵素標準抗体の希釈に特化している。
基質溶液：TMB基質のように、酵素標識抗体中のHRPと反応し、色変化を産生することができる。
せんじょうえき：通常は濃縮液であり、使用する時は割合によって蒸留水または脱イオン水で希釈し、酵素連板を洗浄し、結合していない物質を除去し、背景干渉を低減する必要がある。
ていしえき：多くは強酸溶液（硫酸など）であり、基質の発色反応を中止し、反応液の色を安定させ、読みやすい。
シーリングフィルム：インキュベーション中に酵素プレートを覆い、液体の蒸発と外部汚染を防止するために使用する。
取扱説明書：キットの使用方法、注意事項、性能指標などを詳しく紹介する。
サンプル要件
血清：血液採取後、室温で2時間または4℃で一晩放置し、その後1000×gで20分間遠心分離し、清を採取した。採血には、熱原、内毒素のない使い捨て器材を使用しなければならない。
血漿：抗凝固剤としてエチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ヘパリンなどを用いることができる。サンプル採取後30分以内に、2〜8℃で1000×gで15分間遠心分離し、上清を採取した。
細胞培養上清：細胞培養上清を1000×gで20分間遠心分離し、細胞破片と不純物を除去した後、上清を取り出して検査に用いた。
組織均質：予冷リン酸塩緩衝液（PBS、0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、残留血液を除去する。組織を切断した後、PBSを約1：9（w/v）の割合で加え、氷の上で十分に粉砕した。さらに5000×gで5〜10分間遠心分離し、検査用に上清を取った。
サンプル採取後、短期間で検査すれば、4℃に保存することができる。長時間保存するには、−20℃または−80℃に置いて凍結保存し、繰り返し凍結融解を避けるためには、溶血サンプルは一般的に検査には適さない。
操作の流れ
準備作業：冷蔵庫からキットを取り出し、30分前に室温に平衡させる。同時に、濃縮洗浄液を所望の割合で蒸留水または脱イオン水で希釈して予備とする。
サンプリング：ブランク穴、標準品穴、サンプル穴を設定します。ブランクホールに試料xi放出液を添加し、標準品ホールに異なる濃度の標準品を添加し、試料ホールに処理した試料を添加し、各ホールの添加量は通常100μLで、軽く混合し、37℃で90分間インキュベートした。
せんじょう：温育が終わった後、孔内の液体を捨て、洗浄液で各孔を満たし、1〜2分間浸漬した後に乾燥させ、5回繰り返し洗浄し、che底が未結合物質を洗浄することを確保する。
酵素標的抗体：1ウェル当たり100μL希釈された酵素標準抗体作動液を添加し、37℃で60分間インキュベートした。
さいせんじょう：上記の洗浄工程を繰り返します。
発色：穴ごとに90μLの基質溶液を加え、軽く混ぜ、37℃で光を避けて15〜30分間発色する（実際の発色状況に基づいて判断する必要がある）。
ていしはんのう：1ウェル当たり50μL終止液を添加し、この時溶液の色は青色から黄色に変化した。
よみとり：終端液添加後15分以内に酵素スケールを用いて450 nm波長で各孔の吸光度（OD値）を測定した。
計算結果：標準品濃度を横座標、OD値を縦座標とし、標準曲線を描画する。サンプルのOD値に基づいて標準曲線から対応する濃度を検出し、サンプルが希釈されている場合は、対応する希釈倍数を乗算して実際の濃度を得る必要があります。
パフォーマンス指標
けんしゅつはんい：異なるキットに差異があり、よく見られる検査範囲は31.2-2000 pg/mLなどの区間であり、多種のサンプル中のIL-6 R含有量の検査要求を満たすことができる。
感度：一般的に15.6 pg/mL以下まで下げることができ、サンプル中の微量のIL-6 Rを検出することができる。
特異性：IL-6 Rに対して高度な特異性があり、他のサイトカイン受容体などの物質とほとんど交差反応がない。
くりかえしせい：板内変異係数は一般的に10%未満、板間変異係数は15%未満であり、検査結果の安定性と信頼性を保証した。
注意事項
明細書に厳格に従って操作すると、異なるロットのキットの試薬は混用できない。
操作時に使い捨て吸込ヘッドを使用し、交差汚染を防止し、サンプリングは必ず正確でなければならない。
十分な洗浄は結果の正確さを保証する鍵であり、洗濯板が底を検査しないと偽陽性結果を招きやすい。
基質溶液は光に敏感であり、遮光保存と使用が必要であり、発色反応は遮光条件下で行わなければならない。
終止液は腐食性があり、操作時に皮膚と目に触れないように保護することに注意してください。
標準品とサンプルはすべて復孔検査を行い、結果の正確性を高めることを提案する。このキットは科学研究用にのみ使用され、臨床診断には使用できない。
