インターロイキン-6 ELISA KITは双抗サンドイッチELISA法を採用し、血清などのサンプル中のインターロイキン-6を正確に定量し、操作が便利で、免疫、炎症などの科学研究に重要なデータを提供した。
インターロイキン-6 ELISA KIT
インターロイキン-6 ELISA KIT生物サンプル中のインターロイキン−6含有量を定量的に測定するためのツールであり、免疫学、炎症研究などの科学研究分野で広く応用されている。以下に説明します。
けんしゅつげんり：二重抗体サンドイッチELISA技術を採用する。キット中の酵素プレートは、抗IL−6特異的抗体によってプリパックされている。試料添加後、試料中のIL−6は固相抗体と特異的に結合し、抗原−抗体複合体を形成した。その後、酵素標識された抗IL-6抗体を加え、それは固相抗体に結合されたIL-6とさらに結合し、「固相抗体-IL-6-酵素標識抗体」のサンドイッチ構造を形成する。洗浄工程を経て、未結合物質を除去し、基質溶液（例えばTMB）を添加する。酵素の触媒下で、基質は発色反応を起こし、色の濃淡はサンプル中のIL-6の含有量に比例する。酵素スケールを用いて特定の波長（通常450 nm）で吸光度を測定し、標準曲線と比較することで、サンプル中のIL-6濃度を算出することができる。
キット組成
酵素ボード：96ウェルまたは48ウェル規格があり、抗IL-6抗体をプリパックし、反応のベクターである。
標準品：普通は凍結乾燥品で、通常は2本あります。使用前に標準品希釈液を再溶解し、0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mLなどの異なる濃度勾配に希釈し、標準曲線を描くために使用する必要がある。
サンプルxi放出液：高濃度の測定対象サンプルを希釈し、サンプル濃度がキットの検出範囲内であることを確保するために使用する。
酵素標準抗体：すなわちHRP標識の抗IL-6抗体は濃縮液であり、酵素標識抗体希釈液を用いて要求に応じて希釈する必要がある。
酵素標準抗体希釈液：酵素標準抗体の希釈に特化している。
基質溶液：TMB基質のように、酵素標準抗体中のHRPと反応して色変化を生じる。
せんじょうえき：多くは濃縮液であり、使用する時は割合によって蒸留水または脱イオン水で希釈し、酵素連板を洗浄し、結合していない物質を除去し、背景干渉を低減する必要がある。
ていしえき：一般的に強酸溶液（硫酸など）であり、基質の発色反応を中止し、反応液の色を安定させ、読みやすい。
シーリングフィルム：インキュベーション中に酵素プレートを覆い、液体の蒸発と外部汚染を防止する。
取扱説明書：キットの使用方法、注意事項、性能指標などを詳しく紹介する。
サンプル要件
血清：血液を採集した後、室温で2時間或いは4℃で一晩放置し、1000×gで20分間遠心分離し、清を取って予備する。採血には、熱原、内毒素のない使い捨て器材を使用しなければならない。
血漿：エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ヘパリンなどの抗凝固剤を用いることができる。サンプル採取後30分以内に、2−8℃で1000×gを15分間遠心分離し、上清を採取した。
細胞培養上清：細胞培養上清1000×gを20分間遠心分離し、細胞破片と不純物を除去した後、上清を採取して検査に用いた。
組織均質：予冷リン酸塩緩衝液（PBS、0.01 M、pH＝7.4）で組織を洗浄し、残留血液を除去する。組織を切断した後、1：9（w/v）でPBSを加え、氷の上で十分に研磨した。さらに5000×gで5〜10分間遠心分離し、検査用に上清を取った。
サンプル採取後、短期間で検査すれば、4℃に保存することができる。長時間保存するには、−20℃または−80℃に置いて凍結保存し、繰り返し凍結融解を避けるためには、溶血サンプルは一般的に検査に適していない。
操作の流れ
準備作業：冷蔵庫からキットを取り出し、30分前に室温に平衡する。同時に、濃縮洗浄液を所望の割合で蒸留水または脱イオン水で希釈して予備とする。
サンプリング：ブランク穴、標準品穴、サンプル穴を設定します。ブランクホールに試料xi放出液を添加し、標準品ホールに異なる濃度の標準品を添加し、試料ホールに処理した試料を添加し、各ホールの添加量は通常100μLで、軽く混合し、37℃で90分間インキュベートした。
せんじょう：温育が終わった後、孔内の液体を捨て、洗浄液で各孔を満たし、1〜2分間浸漬した後に乾燥させ、5回繰り返し洗浄し、che底が未結合物質を洗浄することを確保する。
酵素標的抗体：1ウェル当たり100μL希釈された酵素標準抗体作動液を添加し、37℃で60分間インキュベートした。
さいせんじょう：上記の洗浄工程を繰り返します。
発色：穴ごとに90μLの基質溶液を加え、軽く混ぜ、37℃で光を避けて15〜30分間発色する（実際の発色状況に基づいて判断する必要がある）。
ていしはんのう：1ウェル当たり50μL終止液を添加し、この時溶液の色は青色から黄色に変化した。
よみとり：終端液添加後15分以内に酵素スケールを用いて450 nm波長で各孔の吸光度（OD値）を測定した。
計算結果：標準品濃度を横座標、OD値を縦座標とし、標準曲線を描画する。サンプルのOD値に基づいて標準曲線から対応する濃度を検出し、サンプルが希釈されている場合は、対応する希釈倍数を乗算して実際の濃度を得る必要があります。
パフォーマンス指標
けんしゅつはんい：異なるキットに差異があり、よく見られる検査範囲は15.6-1000 pg/mLなどの区間であり、多種のサンプル中のIL-6含有量の検査要求を満たすことができる。
感度：一般的には7.8 pg/mL以下まで下げることができ、サンプル中の微量のIL-6を検出することができる。
特異性：IL-6に対して高度な特異性があり、他のサイトカインなどの物質とほとんど交差反応がない。
くりかえしせい：板内変異係数は一般的に10%未満、板間変異係数は15%未満であり、検査結果の安定性と信頼性を保証した。
