ヒトII型肺胞上皮細胞ブランド

ヒト気管上皮細胞

一、細胞基本属性

培地：FBS、成長添加剤、Penicillin、Streptomycinなどを含む

液交換頻度：2-3日ごとに液交換

継代プロパティ：2～3世代までの継代が可能

消化液：0.25%膵臓dan白酵素

培養条件：気相：空気、95%、CO2，5%

細胞紹介：人気管上皮細胞は気管組織から分離し、気管（Trachea）、呼吸器の一部、後壁がやや平らな円筒形管状である。上端は第6頸椎下縁を平らにし、環状軟骨とつながっている。下向きから第四、五胸椎体（相当胸骨角平面）の境界に至るまで、左、右の主気管支に分けられ、分岐点は気管杈と呼ばれる。気管は主に14-16個の半環状軟骨から構成され、弾力性があり、軟骨は「C」字形の軟骨環であり、切欠きは後方にあり、各軟骨環は靭帯で連結され、環後方切欠き所は平滑筋と緻密結合組織で連結され、持続的な開状態を維持した。気管上皮は気道と外界環境との接触の最初の防御線であり、各種病原体、炎症媒質作用の標的細胞だけでなく、効果細胞として多種の炎症媒質とサイトカインを合成、放出して気道炎症と免疫反応に関与する。体外培養の初代気管上皮細胞は体内組織と形態構造と機能活動に大きな類似性があるため、基礎及び臨床研究において極めて重要である。

初代細胞分離培養の考え方：

取材−分離−育成−鑑定

まず組織を機体から取り出し、膵dan白酵素/コラーゲン処理を経て単細胞に分散させ、さらに適切な培地で培養し、細胞を一定係数まで増殖させた後、細胞同定を行った。

実験手順：

一、7-10 d雄SDラットを採取し、頸椎脱臼処理し、75%エタノールに浸漬して3-5分間消毒した。

二、超浄テーブルにおいて、ラットの断頭をガラスシャーレに入れ、頭蓋腔を開けた後に全脳を取り出し、予冷を入れたPBSガラスシャーレに入れ、小脳と間脳を除去する。

三、大脳半球を乾燥ろ紙の上でゆっくり転がして軟脳膜と脳膜大血管を除去し、新たに予冷されたPBSガラスシャーレに入れた。

四、細解剖ピンセットを用いて大脳白質、残留大血管と軟脳膜を除去し、大脳皮質を保留する。

六、室温1,000×gで8 min遠心分離し、上澄み液を除去する。

七、沈殿中に20%BSAを加えて再懸濁し、十分に混合し、1,000×g、20 min、4℃で遠心分離し、上清に行った。

八、沈殿物に4 ml混合酵素液II（0.05-0.1%のコラーゲン/分散酵素、0.05-0.1%I型コラーゲン、100-300 U DNaseI）を再懸濁し、混合し、37℃水浴で0.5-1 h消化し、700×g室温で6 min遠心分離し、上清液を除去した。

九、沈殿物をDMEM培養液2 mlに加えて懸濁混合し、遠心分離により連続勾配を形成した12 ml 50%Percoll（25,000×g、60 min、4℃）、1000×g、4℃で10 min遠心分離した。

十、底部に近い赤血球層の上の白黄色の層は精製された微小血管セグメントであり、吸引後DMEMを2回（遠心1000×rpm、6 min、室温）すすぎ、上清液を除去する。

DMEM培養液（20%FBS、4 ug/ml素）を加えて再懸濁し、5%を含むラット血清37℃で一晩インキュベートして調製した細胞培養皿に播種し、37℃、5%CO 2培養箱内で24時間静置培養した後、素を含まない混合培地を交換し、その後、翌日液を交換した。

注意事項：

1.培養は4℃条件下で3〜6ヶ月保存できる。

2.細胞培養中、無菌操作を維持することに注意してください。

3.継代培養中、yi酵素の消化時間は長すぎるべきではなく、そうしないと細胞壁とその成長状態に影響を与える。

4.お客様は細胞を受け取ってから3日前に倍数ごとに何枚かの細胞写真を撮り、細胞状態を記録し、技術部とのコミュニケーションを容易にすることを提案する。輸送の原因で、個別の敏感細胞に不安定な状況が発生することがあります。直ちに私たちに連絡して、細胞の具体的な状況を詳しく知らせて、私たちの技術者が問題が解決されるまで追跡して、訪問してください。

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