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熱不安定性耐高塩ヌクレアーゼ(HL-SAN)

ネゴシエーション可能更新05/06
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原産地

概要

Heat Labile-Salt Active Nuclease(熱不安定性耐高塩ヌクレアーゼ、HL-SAN)は非特異的なインターロイナーゼであり、高塩濃度で優れた活性を有する、また、この酵素は多種の緩衝液の中で活性があり、還元剤処理により失活しやすい。

製品詳細

製品紹介

実験室規模のサンプルの製造か、生産規模のプロセスかについては、核酸除去はタンパク質精製、ウイルスベクターの製造、mNGS中のサンプル処理などのプロセスを改善することができる。核酸酵素の選択は、特に重要である。また、この酵素は多種の緩衝液の中で活性があり、還元剤処理により失活しやすい。これらの特性により、HL-SANはDNAとRNAを除去する必要がある応用において、より適している。

核酸汚染、特に宿主ゲノムDNA汚染は、ほとんどのプロセス及び生物製品の生産において、重点的に解決する必要がある問題である。一方、宿主DNAの存在は、標的生成物の精製及び下流質量分析等に影響する。一方、宿主DNAの残留は機体の深刻な免疫反応を引き起こすことができ、生物製品の重要な品質パラメータの一つであり、FDA及びNMPAなどはHost Cell DNA(HCD)に対して厳格な品質制御要求を持っている。宿主ゲノムDNAの中で、組蛋白質はDNAと核小体を形成し、核小体は緊密に折り畳まれて構造の複雑な染色質を形成する。ヒストンとDNAの間には強いイオン作用と疎水作用が存在し、特殊な構造が加えられているため、宿主DNAが正確に検出され、除去されにくい。すでに文献によると、高塩濃度では組タンパク質とDNAの解離が相対的に低く、これは宿主DNAの検出と除去に有利である。しかし、市販されているほとんどのヌクレアーゼは高塩濃度では活性が弱く、不活化もしている。



製品の特徴

高塩条件下では、DNA除去効率が高く、宿主DNAの残留が少ない、

pIは9.6で、ほとんどの蛋白質と分離しやすい、

還元剤が存在すると、酵素は失活しやすく、後続の流れへの影響を減少させる。



適用範囲

病原微生物検出用途、例えばマクロゲノム配列決定(mNGS)サンプルによる宿主DNAの除去、

タンパク質精製、特にDNA結合タンパク質、

アデノウイルス(AAV)、アデノウイルス(AdV)などのウイルスベクターの調製、

他には宿主DNAを除去するための応用などが必要である。

注意事項

安全と健康のために、実験服を着て使い捨て手袋をはめて操作してください!

本製品は主に科学研究分野に用いられ、臨床診断やその他の用途には適さない。

品質管理

出所:ビヒクル酵母における再構築生産。

活性:HL−SANは10−50℃の温度範囲で高い活性を有する。活動の優れたNaCl濃度は0.5 M、動作範囲は0.25-1 Mである。活動にはMg 2+(>1 mM)が必要である。動作pH範囲は7.5〜9.5、優れたpH値は9.0である。

単位定義:1つの単位は37°Cで30分以内に1 Aの260 nmでの吸光度増加と定義し、50μg/mlの子牛胸腺DNA(D-1501、Sigma)を用いて25 mM Tris-からなる緩衝液中のHCl、pH 8.5(25°C)、5 mM MgCl 2500 mM NaClを用いた。