統計によると、近いうちに80%の有機物及び無機物を高効率液体クロマトグラフィーで分離することができ、その中の逆相クロマトグラフィーのC18カラムは高効率液体クロマトグラフィーの中で最も一般的なカラムの一種である。次にC18カラムの選択、メンテナンス、メンテナンスを紹介します。

一、C18柱の選択

C18の選択の主な考慮事項2カラムフィラーとカラム規格がカラムに与える影響についての質問です。

カラムフィラーの物理的性質はフィラーのクロマトグラフィー挙動に重要な影響を与える。フィラーの主な物理的性質は以下の通りである：粒子度、孔径、孔体積、結合相化学、炭素含有量及びアルキル化処理。

(1)粒度とは、カラムフィラーの粒径の大きさを指す。実際にカラムに表示されている粒子径は平均値です。例えば粒径」5μm」カラム中のフィラーのすべての粒子径が5μm、実際には粒子分布度があります。この分布度はカラム反圧及びカラム効果に重要な役割を果たす。一般的に、平均粒子度が小さいほど、粒子分布度が小さくなり、カラム効果が高くなり、逆圧も高くなります。現在C18カラムフィラーの粒径は4～10μmの双曲線コサインを返します。

(2)孔径とは、フィラー粒子間の孔隙間を指す。一般的に言う孔径とは、フィラーの平均孔径を指す。球形充填剤は柱を詰めた後の平均孔径分布が比較的に狭く、柱床構造が均一で、柱効果が高く、再現性が良い、非晶質充填剤の平均孔径分布は比較的広く、柱床構造は不均一で、流動相の線形速度は不均一で、スペクトルバンドは拡幅されている。平均孔径の大きさは高分子化合物の分離に大きな影響を与え、大きな分子を含むサンプルを分離する際に分子排除効果があるか、吸着効果が発生して定量的な回収率と精度に影響を与える可能性がある。したがって、タンパク質またはポリペプチドのような試料を逆位相クロマトグラフィーで分離する際には、大きな孔径を選択することを考慮しなければならない(如30 nm）の反転柱充填剤を使用します。細孔体積はシリカゲル多孔性のパラメータとして、比較的大きい分子化合物を分離分析する際に参考にすることができ、比較的大きい細孔体積の反転カラムフィラーを選択することができる。

(3)化学結合相充填剤は高効率液体クロマトグラフィーにおいて極めて重要な地位を占めている。極性の大きい有機基を結合することができ、極性の小さい溶媒を流動相とすることができる。極性の小さい有機基を結合し、極性の大きい溶媒を流動相として選択することもできる。C18カラムはシラン化結合型（Si-O-Si-C）存在し、このような結合反応は現在最も一般的に使用されている。例えばオクタデシルトリクロロシランと全多孔性シリカゲルM-ポラシル-C18反応によりアルキル基の化学結合相が生成する、商品名はM-ボンダパク-C18。

(4)炭素含有量、すなわちフィラー中の炭素含有量。従来の測定技術は、フィラーを炭化水素結合破断まで加熱し、損失した重量または形成された二酸化炭素を測定することによって炭素含有量を計算する。炭素含有量は、炭素結合の長さを増加させるか、結合密度を増加させることによって増加させることができる。炭素含有量が増加し、カラムの保持値が増加した。結合相のクロマトグラフィー挙動は結合密度と関係があり、シリカゲルの密度及びフィラーの表面積とも関係があり、フィラーの密度が高いほど、フィラーに必要なシリカゲル量が多くなり、カラムの炭素含有量も高くなる。使用する場合2密度の異なる同じ炭素含有量のフィラー充填カラムでは、保持挙動が明らかに異なる。したがって、クロマトグラフィー挙動を単独で炭素含有量で予測するには不十分である。

（5）C18シラン化剤は、2nm高分子であるため、隣接するシラノール基に結合したC18シラン化試薬は深刻な立体障害を生じる。その結果、シリカゲル表面に大量の残留シラノール基がシラン化試薬と反応せず、これら極性シラノール基はあるクロマトグラフィー条件下でアルカリ化合物と相互作用してピーク尾引きを引き起こし、定量分析結果に影響を与えることができる。これらの問題はある程度アルキル化処理によって克服することができる。アルキル化処理は、シリカゲル表面のシラノール基を低減するために結合相上で行われる独立反応である。アルキル化処理には小分子を用いる(例えばトリメチルシラン)の試薬であり、その空間抵抗ははるかに小さいC18基。ほとんどの固定相は30%上書き可能な結合位置。報告によると、いくつかの非常に活発な化学試薬と特殊な反応条件を通じて、最高の被覆量は50%。シリカゲル結合相の物理的特性をよく理解することは、高速液体クロマトグラフィーの反応において適切なカラムを選択するのに役立ちます。表面的に見るC18カラムは化学官能基は同じであるが、実際には異なるブランドのC18カラムの性能に大きな差があり、異なる分離結果が生じる可能性があります。

カラムフィラーの選択はクロマトグラフィー分離の可能性に関係し、カラム規格の選択は分析速度、分離能力、検出能力及び分析毎の溶媒消費などに直接影響する。柱の仕様には、柱の内径と柱の長さの2つの側面があります。柱の内径、分析型は一般的に2～6 mm,せいぞうがた20ミリメートルああ、大きい者は達することができる80ミリメートル;柱の長さ、解析タイプ5～30センチメートル、調製型15～50センチメートル。一般的に、カラム内径は分離度と分析時間の関係に影響しない。今日、柱技術は異なる柱内径の柱が同じ性能を持つように発展している。異なる内径の柱はまたそれぞれ特徴があり、同じ分析時間と分離度にとって、内径の大きい柱は内径の小さい柱より溶媒を消費することが多い。一方、より小さな内径のカラムは、同じ検出信号に対して必要なサンプル量も少ない。したがって、試料量には*があり、小内径カラムを使用することができる。カラム長の増加は分離効果を改善することができるが、抵抗も増加し、入口圧力を高めなければならない。柱圧は分離度の増加と分析時間の減少に同時に影響する主要な障害である。分離度、分析時間及び柱圧の3つは互いに制約し合い、その中の2つを選択すれば、第3つの要素を選んでください。長いカラムは高解離度を与えることができ、短いカラムは迅速な分離を提供することができ、サンプルの状況に応じて適切なカラムを選択することができます。

C18柱選択の基本原則:

(1)アルカリ性化合物の尾引き現象を防止するために、アルキル化処理されたキャップのフィラーを選択することができる。

(2)炭素含有量の高い柱を選び、保持値を増やす。

(3)短い柱を選択(如15センチメートル，7.5 cm）。

(4)小粒度の充填剤を選択する。

(5)分子量の大きい成分には大孔径フィラーを用いたカラムを選択した。

二、C18柱の日常的な使用とメンテナンス

日常的な分離分析作業では、カラムの使用が適切かどうかは、カラムの寿命に直接影響します。次に紹介するC18柱が日常的に使用する際に注意すべきこと。

(1)柱は脱着、交換する時、動作は軽く、継ぎ手の締め付けは適度にしなければならない。柱床に空隙が生じないように、強い機械的振動を防止しなければならない。

(2)もし器具が通常の分析に用いられ、サンプルの種類は限られているが、分析回数が多い場合は、各種類の通常の分析に配置してもよい1柱の寿命を延ばすのに役立つ専用柱。

(3)カラム温度制御装置を使用する場合は、移動相に投入してから昇温することに注意してください。

(4)移動相を使用する前に、カラム効果や影響検出などを低下させないように脱気処理を行う必要がある。試料溶液は適切な前処理と濾過を経て、カラム汚染と閉塞を減らす必要がある。

(5)移動相の種類を交換する際には、溶媒の相互溶解性に注意し、塩析現象の発生を防止しなければならない。

(6)柱の実際の操作圧力は充填時の最高圧力より低く、最高圧力の半分以下であることが望ましい。一般的に超えない20 593.965～29 419.95 キロパラ。低圧力で(≤14 709.975 kPa）の範囲で使用することで、長い期間柱を高柱効果に保つことができます。

（7）C18カラム属非極性結合相カラム、移動相のpH値は、2～7柱を壊さないように、間を作ります。

(8)分離分析作業を完了した後、直ちに停止すべきではなく、クロマトグラフィー分析システムを適時に洗浄する必要があり、一般的には0.5時間以上により、カラム内の不純物を除去する。

(9)流動相に塩類がある場合は、まず水で十分に洗浄します。アミン類であれば(例えばトリメチルアミン類又はテトラブチルアミン類)移動相に追加するには、50%メタノール和0.05%リン酸溶液混合溶媒で洗浄し、水だけで洗浄しないでください。

（10）C18一般に保存溶媒としてメタノールを用い、カラムが乾き破損しないようにしている。クロマトグラフィー流路に水や緩衝液を長時間保持することは厳禁です。

(11)適切なC18不純物粒子及び不可逆吸着性干渉物から分析カラムを保護するための保護カラム。保護カラム内の充填剤の粒子度は分析カラム充填剤の粒子度とできるだけ一致しなければならない。

(12)柱の保存期間はあまり長くしてはいけない。短期的には使わないC18カラム、メタノールで洗浄30～60分を選択し、カラムの両端を密封します。長い間使われていない柱は、1つは定期的に洗浄し、再密封する方法を採用すること、2つ目は洗浄後、柱の両端にそれぞれ取り付けられる1メタノールを充填した一定容量の容器のみ(端だけ入れてもいいです)を用いて、長い保管中のカラム内溶媒の蒸発を補う。

三、C18柱のメンテナンス

カラムは日常的に使用する過程で、保護が厳格であるにもかかわらず、サンプルと移動相は前処理を経ても、長時間の使用を経ても、柱が汚染され、固定相の流失、板締め、柱床の陥没、柱効果の低下などを回避することは困難である。修理によっては、一部の柱効果を回復することができます。

1,カラム汚染再生技術

カラム汚染後、適切な溶媒で洗浄し、カラムを再生することができます。C18カラムの通常の再生洗浄方法は：メタノール、トリクロロジアサン、メタノール/水各60 mLカラムを順に通過し、メタノールを再使用60 mLカラムを平衡させた後にカプセル化すると、カラム効果は正常に戻ります。必要に応じて、カラム汚染特性(例えば有機汚染、塩類汚染など)を選択し、0.05 モル/L H2SO4、0.5 モル/L H3PO4または0.1 モル/L EDTAナトリウム塩を洗い流し、その後水で洗い流し、最後にメタノール平衡カラムを用いて封印した。深刻な汚染に対するC18カラムは、水、メタノール、クロロホルム、エタンで順次洗浄した後、順番に逆さまにしてから洗浄することができる1毎回使用する溶媒60 mL、検出器を接続せず、最後にメタノール平衡カラムで封止した。

2,カラム汚染の修復

カラム汚染の再生が無効であるか、カラム汚染が深刻であることが知られている場合は、カラム補修の方法で解決することができるが、カラム汚染の深さは超えてはならない5 ミリメートル方法は特製スコップを用いて汚染部分を掘り起こし、カラムフィラーと同じ固定相と流動相を混合してスラリー状にし、その後スラリー状固定相を掘り取られた部分に丁寧に埋め込む(リアカバーの固定相をできるだけ原装の密着度に近づけるようにする)、端面を平らにすればいい。修理された柱は、柱頭の両端のスクリーン板の孔径が一致していれば、柱を逆さまにして一般的な時間を使用することができ、流動相洗浄作用によって柱床の緊密さを回復することを目的としている。

3,柱の陥没の修正

柱が陥没する原因は多い。陥没がそれほどひどくない場合は、柱頭の両端のスクリーン開口部が一致している場合は、柱を通常の時間で反転させることで、性能を回復することができます。集約が深刻な場合（5 mm）左右)時には、カラム汚染の修復方法を用いて補修すればよい。