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動的光散乱計の動作手順
日付:2025-09-09読み:0
一、ダイナミック光散乱計操作前準備
環境要件
平穏、乾燥、温度の適切な場所を選んで機器を設置し、機器の底部と地面が平穏に接触し、光路が垂直に地面にあり、機器の底部が地面から少なくとも50 cm離れていることを確保する。
空気の流れ、振動及び強い電磁干渉源(例えば大型モータ、高周波設備)を避け、測定環境の安定を確保する。
サンプル調製
分散性:試料は液体媒体中に均一に分散し、凝集や沈殿を避ける必要がある。
濃度制御:
タンパク質サンプル:14 kDaタンパク質濃度は1 mg/ml、28 kDaタンパク質濃度は0.5 mg/mlを推奨した。
その他のサンプル:粒径の大きさに基づいて濃度を調整し、多重光散乱(濃度が高すぎる)または信号が弱すぎる(濃度が低すぎる)ことを避ける。
気泡除去:試料は12000 rpmで10分間遠心分離し、清液を取り、気泡の影響測定を避ける。
試料量:試料プールの容量は約14μlで、充填を確保するために20μlの試料を準備することを提案した。
計器検査
電源、接続線、光路システムが正常かどうかを検査し、レーザ、検出器、温度制御モジュールなどの部品の接続がしっかりしていることを確認します。
予熱装置は10〜15分間、システムが安定したら測定を行う。
二、操作手順
電源投入とソフトウェア接続
電源を投入し、ホスト、温度制御モジュール、コンピュータの電源を順次オンにします。
測定ソフトウェア(Zetasizer、IRSoftなど)を実行し、「Connect」または「Hardware」をクリックしてソフトウェアと機器の接続を確立し、接続が成功したらアイコンが緑になることを確認します。
サンプルロード
微量液取器とサンプルプールを水で洗い流し、汚染を避ける。
微量液取機を用いて試料をゆっくりと試料プールに注入し、針がプールの底や側壁に擦られないようにした。
サンプルプールをサンプル室に入れ、矢印が自分に向いていることを確認し、サンプル室の蓋をします。
パラメータ設定
機器パラメータ:
レーザー強度:サンプル濃度に応じて調整する(高濃度サンプルは信号過負荷を避けるために電力を下げる必要がある)。
温度:測定温度(例えば25℃)を設定し、120秒間恒温してサンプル温度を安定させる。
溶媒パラメータ:
溶媒の屈折率(RI)と粘度(Viscosity)を入力し、パラメータは温度変化に応じてリアルタイムで更新する必要があります。
サンプルパラメータ:
タンパク質サンプルのようなサンプルの屈折率(RI)と吸収率(Absorption)を入力し、「Material」タイプを選択し、対応するパラメータを入力します。
測定パラメータ:
測定時間:サンプルの安定性設定(例えば連続測定3回、毎回120秒)による。
散乱角度:通常は90°(小粒子)または173°(大粒子)を選択します。
データフィルタリング:Baseline=1±0.003などの偏差範囲を設定し、異常データをフィルタリングします。
データ収集
「Start」または「Measure」をクリックして測定を開始し、機器は散乱光強度の時間変化を自動的に記録する。
測定中に機器やサンプルプールに触れないようにし、光路のずれを防止します。
赤色データは設定範囲を超えた値であり、解析時には採用しない。
データ分析
粒径分布:ソフトウェアは流体力学半径(Rh)及び多分散性指数(PDI)を自動的に計算し、粒径分布図(例えば対数正規分布、MSDマルチサイズ分布)を生成する。
相関関数:光強度変動と時間の関係を分析し、サンプル均一性を評価する。
データエクスポート:CSV、Excel、またはPDF形式に保存され、さらなる処理やレポート生成に便利です。
三、ダイナミック光散乱計操作後メンテナンス
清掃とメンテナンス
測定完了後、直ちに水でサンプルプールを洗浄し、乾燥後保管し、残留サンプルの汚染を避ける。
レーザ窓、プローブなどの光学素子を定期的にクリーニングし、クリーン布や専用洗浄剤を使用します。
機器内部に異物やほこりがないかどうかを検査し、光路系乾燥管の吸湿状態を維持する(吸湿には乾燥再生が必要)。
キャリブレーションと検証
標準粒子(ポリスチレンラテックスなど)を定期的に使用して較正し、測定の正確性を確保する。
機器の接続が正常かどうか、各部品の取り付けがしっかりしているかどうかを検査し、電磁互換性試験を行う。
ストレージとセキュリティ
機器を使用しない場合は、乾燥、通風、腐食性ガスのない環境に保管し、電源を切り、ダストカバーをかぶせる。
危険化学品との接触を避け、安全事故を防止する。