ZETA LIFE細胞増殖及び毒性検査-CKキット

ZETA LIFE細胞増殖及び毒性検査-CKキット

価格：￥615 - 2800

ブランド：ゼータ生活。

商品番号：K009

产地：アメリカ

サプライヤー:上海徂徠同バイオテクノロジー株式会社

数量:1000

英語名：cck8

賞味期限：24ヶ月

条件の保存：4°C遮光保存

仕様：500トンから3000トン

CellCounting KitはCCKキットと略称され、WST（水溶性テトラゾール塩、化学名：2−（2−メトキシ−4−ニトロフェニル）−3−（4−ニトロフェニル）−5−（2，4−ジスルホベンゼン）−2 Hテトラゾールモノナトリウム塩）に基づく細胞増殖と細胞毒性に広く応用されている高速高感度検出キットである。

CCKはMTTのアップグレード代替製品であり、MTTや他のMTT類似製品、例えばXTT.MTSなどに比べて明らかな利点がある：

−CKがミトコンドリア内の脱水素酵素によって還元されたformazanは水溶性であり、溶解に特定の溶解液を必要としないが、WSTとXTT、MTSによって生成されたformazanはいずれも水溶性ではないので、後続の溶解工程を省くことができる。

−CKはXTTやMTSよりも安定しており、実験結果をより安定させている。

−CKはMTT、XTTなどに比べて線形範囲が広く、感度が高い。

CCK法と他の検出方法との比較：

取扱説明書:

一、標準曲線を作る（細胞の具体的数量を測定する時）

1、調製した細胞懸濁液中の細胞数を細胞計数板で計数し、その後細胞を接種する。

2、割合（例えば：1/2割合）で培地等比で−1つの細胞濃度勾配に希釈し、一般的に3−5つの細胞濃度勾配を行い、1群当たり3−6個の復孔を行う。

OD値は縦軸（Y軸）の標準曲線です。この標準曲線に基づいて未知のサンプルの細胞数を測定することができる（この標準曲線を試用する前提は実験の条件が1

したがって、細胞の接種数及びCCK添加後の培養時間の決定を容易にする）。

二、細胞活性検査

1、96ウェルプレートに細胞懸濁液（100 ulウェル）を接種する。培養プレートを培養箱に入れて予備培養した（379 C、5%CO 2の条件下）。

2、各ウェルに110 ulのCCK溶液を添加する（穴に気泡を生成しないように注意して、それらはOD値の読み取りに影響する）。

3、培養プレートを培養箱内で14時間インキュベートした。

4、酵素スケールを用いて450 nmでの吸光度を測定する。

プレート遮光は室温条件下で保存した。

三、細胞増殖~毒性検査

1、96ウェルプレートに100 uの細胞懸濁液を配置する。培養プレートを培養箱で24時間予備培養した（379 C、5%CO 2の条件下）。

2、培養プレートに10 ulの異なる濃度の測定対象物質を添加する。

3、培養プレートを培養箱で適切な時間（例えば：6、12、24、または48時間）インキュベートする。

4、穴ごとに10 ul CCK溶液を添加したい（穴から気泡が生成されないように注意して、それらはOD値の読み取りに影響する）。

5、培養プレートを培養箱内で1〜4時間インキュベートした。

6、酵素スケールを用いて450 nmでの吸光度を測定する。

7、一旦OD値を測定せず、後で測定しようとする場合は、穴ごとに10 ul 0.1 MのHCL溶液または1%wIv SDS溶液を加え、培地を覆って室温条件下で遮光保存することができる。

注意：測定対象物質に酸化性または還元性があれば、CCKを加える前に新鮮な培地を交換し（培地を除去し、培地で細胞を2回洗浄し、その後に新しい培地を加える）、薬物影響を除去することができる。もちろん薬物の影響が比較的小さい場合は、培地を交換することなく、培地に薬物を加えた後の空白吸収を直接差し引けばよい。

準備：

①最初にいくつかのウェルを作って細胞の数を手探りで接種し、CCK試薬を添加した後の培養時間を模索することを提案した。

②条件がある場合は多チャンネルピペットを採用することを提案し、平行穴の減少の差を減らすことができる。加入

CCK試薬の場合、培地ページの下に挿入しないでください。気泡が発生しやすく、OD値の読み取りが妨げられます。

③白血球は長い時間培養する必要があるかもしれない。

④標準96ウェルプレートを用いた場合、壁貼り細胞の小接種量は、少なくとも1，000個／ウェルL（100 u培地）であった。

推奨接種量は2500個/Fウェル（100 ul培地）以上である。24ウェルプレートまたは6ウェルプレートを用いた実験を行う場合は、まず1ウェル当たりの接種量を計算し、1ウェル当たりの培地の総体積の10%に基づいてCCK溶液を添加します。

⑤450 nmのフィルタがなければ、430 ~ 490 nmの間の吸光度を有するフィルタを用いることができるが、450 nmフィルタの検出感度は高い。

⑥培地中のフェノールレッドの吸光度は計算時に、空洞中の本底の吸光度を差し引くことによって除去することができるので、検出に影響を与えることはありません。

動的計算：

細胞活性*（%）=[A（投与）-A（空白）]/[A（0投与）-A（空白）]x 100

A（薬物添加）：細胞、CCK溶液及び薬物溶液を有する孔の吸光度

A（ブランク）：細胞の孔を持たずに培地とCCK溶液を有する吸光度

A（0添加）：薬物溶液のない細胞、CCK溶液を有する孔の吸光度

*細胞活性：細胞増殖活性または細胞毒性活性

保存条件：

温声提示：臨床治療には使用できない。