qPCRの多機能RT SuperMix试剂

貯蔵輸送条件

-20℃

製品構成

qPCRの多機能RT SuperMix试剂

製品紹介

All-in-One RT SuperMix for qPCR（with dsDNase）は、M-MLVGIIIReverse Transcriptaseとその反応Buffer、RNA酵素阻害剤、dNTPs、Oligo（dT）20 VNとランダムプライマーなどの1鎖cDNA合成に必要なすべての成分を含み、RNAテンプレートと水を加えるだけで反応を開始することができる、高効率、簡便、汚染を低減する高品質の1鎖cDNA合成キットである。All-in-One RT SuperMix for qPCR（withdsDNase）はアップグレード後の一鎖cDNA合成キットとして、15分以内に最長12 kbcDNAを得ることができ、生成物はqPCR、通常PCRなどの実験に用いることができる。組織や細胞から抽出されたRNAはゲノムDNA汚染を残すことが多く、逆転写前に除去処理をしなければ、下流でqPCR反応を行うとゲノムDNAとcDNAが同時に増幅され、特にプライマーが同じエキソン上に設計されている場合、定量的正確性に影響を与える。本キットに用いたdsDNaseは、二本鎖DNAまたはDNARNAヘテロ二本鎖中のDNAを特異的に消化することができ、逆転写反応温度で急速に不可逆的に失活することができる感熱性を有する。ゲノムDNA汚染の深刻さに基づいて、ゲノムDNA汚染と逆転写を分離して行うか、ゲノムDNA汚染と逆転写を1ステップで行う操作方法を選択することができる。

使用方法

ゲノムDNA含有量の低いRNAサンプル（推奨スキーム）

qPCRの多機能RT SuperMix试剂

①氷上に次の反応系を調製する：

a.キットから抽出した高品質RNAをテンプレートとして使用することを推奨する。

③ゲノムDNA汚染を除去するために37℃で2分間インキュベートする、

④55℃で15分間インキュベートする、

⑤反応終了後、85℃で2分間インキュベートして反応を終了する、

⑥得られたcDNAを迅速に氷の上に置き、後続の実験に使用する。またはすぐに-20℃に保存します。

ゲノムDNA含有量の高いRNAサンプルに対して

1.ゲノムDNA汚染除去

①氷上に次の反応系を調製する：

a.キットから抽出したRNAをテンプレートとして推奨する。

③ゲノムDNA汚染を除去するために37℃で2分間インキュベートする、

注：RNA中のゲノムDNA汚染が深刻であれば、37℃のインキュベーション時間を適切に5 minまで延長することができる。

④65℃で2分間インキュベートし、dsDNaseを失活させ、氷の上に置く。

2.第一鎖cDNA合成

①氷上に次の反応系を調製する：

②柔らかく吸って混ぜて、瞬間的に離れる、

③50℃で15分間インキュベートする、

注：標的RNAにPoly（A）構造が含まれていない場合、予め25℃で10分間インキュベートすることができる。

④反応終了後、85℃で2分間インキュベートし、反応を終了する。

注：cDNA溶液は-20℃で保存し、1週間を超えないことを提案する。−80℃に置くと長期保存が可能である。

注意事項

プレミックス液にはすでにOligo（dT）20 VNとランダムプライマーが含まれており、Poly（A）構造を含む真核生物mRNAだけでなく、Poly（A）構造を含まない原核生物RNA、真核生物rRNA、tRNAなどのテンプレートにも適しているが、miRNAなどの小さなRNAテンプレートには適していない。

米国Azaood社は2004年に設立され、生命科学の研究、診断、生物技術の応用に用いられる高品質精製酵素、蛋白質、核酸と細胞分離キット、子牛血清を開発、生産した。Azood社はISO 9001認証を取得した主要メーカーで、研究から大規模な量産生物加工、OEM応用と要求に対応できる会社です。