汎用SYBR緑色qPCR混合物

貯蔵輸送条件

長期保存は-20℃で光を避けて保存し、Mixが融解した後、4℃の光を避けた条件下で1ヶ月間安定して保存することができ、できるだけ繰り返し凍結融解を避けることができる。

プロダクトコンポーネント

汎用SYBR緑色qPCR混合物

製品紹介

汎用SYBR緑色qPCR混合物SYBRです® Green Iキメラ染料法専用qPCR試薬は、2×予混合液であり、プライマーとDNA試料を除くすべてのqPCR成分を含み、操作手順を減少させ、サンプリング時間を短縮し、汚染確率を低下させることができる。その核心成分は抗体修飾された熱起動Taq DNAポリメラーゼであり、入念に最適化されたBuffer系及びPCR反応促進因子を配合し、製品に特異性が強く、増幅効率が高いなどの特徴を持たせ、非特異性増幅を効果的に抑制し、広い濃度範囲のテンプレートに対して正確な定量を行い、安定で信頼性の高いqPCR結果を得ることができる。予混合液には汎用補正染料が含まれており、ほとんどのqPCR装置と互換性があり、ROX補正が必要な機器を含め、実験中に補正染料を追加する必要は一般的にはありません。

使用方法

①Mix中に染料があらかじめ混合されているため、その保存または反応系の調製過程は強い光照射を避けるべきである、

②使用前に上下を逆にしてMixを軽く混合し、渦振動を混合しないで、気泡が多すぎないようにしてください。

③MixにはUniversal補正染料が含まれており、全機種に適しており、染料を追加する必要はありません。

2.提案されたqPCR反応システム

a.通常推奨されるプライマーの最終濃度は0.2μMであり、反応効果が悪い場合は0.1 ~ 1μMの範囲で調整することができる、

b.テンプレート添加量は1 ~ 2μlを推奨し、例えばテンプレートタイプは未希釈cDNA原液であり、テンプレート添加量は総反応系の10%を超えてはならない。異なる種類のDNAテンプレートに含まれる標的遺伝子コピーの数は異なり、必要に応じて勾配希釈を行い、最適なDNAテンプレート添加量を決定することができる。

3.qPCR反応手順（機種に応じて適宜調整可能）汎用SYBR緑色qPCR混合物

ツーステップ法

さんだんほう

増幅フラグメントが200 bp以内であれば、アニーリング&延長（延長）時間は15 secに設定することができ、また、アニール&延長（延長）時間の設定は、使用するqPCR計に必要な最短データ収集時間に応じて調整する必要があります。

b.異なるqPCR計の溶解曲線採取手順に差があり、一般的に計器のデフォルトの溶解曲線採取手順を使用することができる。

4.実験最適化

デフォルト反応条件を使用して反応性能がよくない場合は、反応条件の最適化が必要であり、プライマー濃度と増幅プログラムの両方から行うことができる：

①プライマー濃度調整

プライマー終濃度が0.1 ~ 1.0μMの範囲で変化すると、プライマー濃度が低いほど増幅特異性は高くなるが、増幅効率は低下する。

②増幅プログラム最適化

増幅特異性を高めるためには、2段階プロセスを使用したり、アニール温度を高めたりすることができます。

5.プライマー設計原則

①増幅産物長は80 ~ 200 bpに制御することを提案する、

②プライマー長は18 ~ 25 bp、

③順方向プライマーと逆方向プライマーのTm値の差は1℃を超えないことが好ましく、Tm値は58 ~ 62℃に制御することが好ましい、

④プライマーのGC含有量は40%~ 60%に制御する、

⑤プライマーA、G、C、Tの全体分布はできるだけ均一にし、T/CまたはA/Gの連続構造（特に3'端）を避ける、

⑥プライマー3'末端の最後の塩基はGまたはCであることが好ましい、

⑦プライマー内部または2つのプライマー間の相補配列を避ける、

⑧NCBI BLAST機能検索を用いてプライマーの特異性を確認する。

リーーダー者、Azood社はISO 9001認証を取得した主要メーカーで、研究から大規模な量産生物加工、OEM応用と要求に対応できる会社です。