TSKgel Protein A-5 PWカラム

TSKgel Protein A-5 PWカラム

TSKgel Protein A-5 PWカラムは、複数の抗体の迅速な分離と正確な定量のために設計されています。得られた細胞培養液からモノクローナル抗体を捕捉し、正確に定量し、注入分析は1回2分以内に完了することができる。このカラムは再生や洗浄なしで2000回以上の注入分析を行うことができる。

TSKgel Protein A-5 PWカラムには、高架橋度のヒドロキシル化メタクリル酸ポリマービーズが充填されており、クロマトグラフィー分析において高い流速を使用しながら、クロマトグラフィー効率、ピーク幅、分離度を維持することができます。その組換えタンパク質A配位子はコドン修飾されたCドメイン六量体である。この強化組換えタンパク質A配位子は、TSKgel 5 PWマトリックス微小球に多点付着結合することにより、0.1 mol/L NaOH溶液中で優れた安定性を有する。

TSKgel Protein A-5 PWカラムは広いサンプリング量範囲を有し、細胞培養液処理の異なる段階におけるモノクローナル抗体の効力価を正確に測定することができる。その低レベルの蛋白質A脱落率は、予備的な特徴付けのための小規模モノクローナル抗体精製の理想的な選択となる。

TSKgel Protein A-5 PWは、多孔質親水性ポリマーマトリックスのTSKgel G 5000 PWフィラー表面に組み換えProtein A官能基を導入し、PEEKカラムチューブ内に充填した親和性（AFC）カラムです。

Protein AはIgGのFc領域と特異的に結合することができるため、Protein AはIgGと不純物を含む細胞培養上清液などのサンプルからIgGを特異的に吸着分離することができる。また、既知濃度のIgGによるキャリブレーションの作成

曲線を用いて、未知の試料中のIgG濃度を定量することができる。

TSKgel Protein A-5 PWカラムの基質、官能基、官能基の結合方法はバルクフィラーTOYOPEARL AF-rProtein A HC-650 Fと同じです。したがって、このカラムはTOYOPEARL AF-rProtein A HC-650 Fと同様の分離選択性能を持っています。

マトリックスの粒子径が大きく、機械的強度が高いため、このカラムは高流速条件下で使用することができ、IgGの高フラックス分析にも使用することができる。また、溶媒変化によるフィラー膨潤効果が比較的小さいため、流動相に添加することができる

有機溶媒を加える。

また、このカラムは化学的安定性が高く、耐アルカリ性の官能基を用いているので、NaOH水溶液を用いて洗浄することができる。NaOH水溶液を用いてカラムを洗浄する場合は、注入バルブから0.1 mol/L NaOH水溶液0.5を注入してください

〜2ミリリットル

2-2.標準分離条件

IgGの多くは中性条件下（pH 7.0〜7.5）でProtein Aに吸着され、酸性条件下（pH 2.5〜3.5）で溶出されるため、TSKgel Protein A−5 PWを用いて抗体を分離する場合、通常は2種類のpHの異なる溶液の次数を用いている

階段式勾配溶出法。

吸着と溶出の移動相にはリン酸緩衝液が一般的に用いられるが、移動相には低pHのクエン酸塩緩衝液を用いてもよい。吸着緩衝液を用いてカラムを予め平衡させた後（カラム体積の5倍以上の緩衝液を用いて平衡させた）、注入

後、IgGのみが柱に吸着される。その後、溶出用流動相に交換し、IgGを溶出した。

流動相に高濃度塩（例えば0.15 mol/L NaClなど）を添加することができるが、疎水性の高いIgGはカラム上で非特異的吸着が起こりやすいので注意が必要である。また、疎水性の高いIgGを分析する際には、

衡液及び溶離液にエタノールなどの水溶性有機溶媒又は精AN酸（0.2 mol/L）を添加することにより、非特異的吸着を効果的に抑制することができる。ただし、上記の場合は移動相の交換によりベースラインが変動する可能性がありますので、注入前に、より

移動相を入れ替え、確認する。

移動相の例

例1

移動相A：20 mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.4

移動相B：20 mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH 2.5

ケース2

移動相A：20 mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.4/エタノール＝90/10（v/v）

移動相B：20 mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH 2.5/エタノール＝90/10（v/v）

ケース3

移動相A：20 mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH 7.4

移動相B：50 mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH 2.5

高性能親和性カラムTSKgel Protein A-5 PWカラムは耐久性が良く、アルカリ性溶液を用いて洗浄することができ、不純物を多く含む細胞培養液中のIgGの迅速かつ高精度定量に適している。また、IgGの定量範囲は広く、培養初期の低濃度サンプルから高濃度サンプルまでの分析に用いることができる。

TSKgel Protein A-5 PW製品仕様と注文情報

仕様パラメータ

プロジェクトパラメータ

開口100ナノメートル

りゅうけい20µm

pH安定性2.5 - 12

はいすいていこうげんかい1000キロダルトン

はいごうき組換えタンパク質A（Cドメイン六量体）

はいごうみつど0.9-1.0 g/Lゲル

注文情報

品番（P/N）記述サイズ

0023483TSKgel Protein A-5 PWカラム4.6 mm内径x 3.5 cm長さ

TSKgel Protein A-5 PWカラム

南通海660化学有限公司