ラットアポトーシス誘導因子（AIF）ELISAキット

大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA检测试剂盒

検出原理 :

本キットは二抗体サンドイッチ酵素を用いた免疫吸着試験（ ELISA）。 ラットアポトーシス誘導因子（AIF）抗抗体（固相抗体）のミクロポア酵素スケールプレートに、 ラットアポトーシス誘導因子（AIF） キャリブレーション品と測定対象サンプル、さらに別の株を加える HRPマークの抵抗 ラットアポトーシス誘導因子（AIF） （酵素標識抗体）、インキュベーションと十分な洗浄を経て、結合していない成分を除去し、微孔板の固相表面に固相抗体を形成する −抗原−酵素標的抗体のサンドイッチ複合体。基質AとBを添加し、基質はHRP触媒下で、青色生成物を生成し、終止液（2 M硫酸）の作用下で、最終的に黄色に変換し、酵素スケール450 nm波長上で吸光度（OD値）を測定し、吸光度（OD値）と測定対象サンプル中 の濃度は正相関している。校正品曲線をフィッティングして、サンプルの中を計算することができます ラット（AIF）の濃度です。

必要な機材と試薬

1、 酵素尺度計 （波長450 nmフィルタ）

2、37°C恒温箱（細胞用CO 2培養箱の使用は推奨されていない）

3、 /5 mlスポイト（手動洗濯用）

4、 無菌 EP管及び使い捨て吸込ヘッド

5、 精密なシングルトラック （0.5-10μL、5-50μL、20-200μL、200-1000μL）と多チャンネルピペット（ピペット使用前に校正が必要）。

6、吸水紙及び添加槽

7、脱イオン水または蒸留水

キット構成：

サンプル収集 :

1、血液を収集する試験管は使い捨ての無熱原、無内毒素試験管でなければならない。

2、 EDTA 。溶血、高脂血標本の使用を避ける。

3、標本は澄みきって透明で、懸濁物は遠心分離して除去しなければならない。

4、 標本収集後、適時に検査しない場合は、1回の使用量で分注し、凍結保存してください -20℃、-70℃の冷蔵庫内で、繰り返し凍結融解を避け、3-6月中に検査した。

5、 サンプル中の測定物濃度が標準品の最高値より高い場合は、実際の状況に応じて、 適切な倍数希釈を行う （希釈倍数を決定するための予備実験を提案する）。

保管条件：

サンプル採取及び保存：

1、 2時間または2〜8℃で一晩過ごす。1000×gで20分間遠心分離し、上清を採取した。すぐに検出するか、1回の使用量で−20°Cまたは−80°Cに分注凍結保存することができる。

2、 血漿抗凝固剤の推奨使用 EDTA-Na2/K2，サンプル採取後30分以内に2−8°C、1000×gで15分間遠心分離し、上清を採取した。すぐに検出するか、1回の使用量で-20°Cまたは-80°Cに分注凍結保存することができます。その他の抗凝固剤の使用と選択はサンプル調製ガイドラインを参照してください。

3、組織サンプル組織サンプルは一般的に組織均質スラリーを作製し、処理方法は以下の通り：
3.1、 ターゲット組織を氷の上に置き、予冷した

3.2、 氷の上で分解液で組織均質パルプを研磨する。分解液を添加する体積は組織の重量に依存し、一般的には 組織破片1 gに9 mlの分解液を使用した。また、分解液にプロテアーゼ阻害剤、例えば1 mM PMSFを添加することを提案した。

3.3、 再利用可能超音波破砕または繰り返し凍結融解によるさらなる処理 （超音波破砕中、氷浴で温度を下げる必要がある、繰り返し凍結融解法は2回繰り返すことができる）。

3.4、 5000×gは5分間遠心分離し、上清を残して検査することができる。または1回の使用量で−20°Cまたは−80°Cに分けて凍結保存する。

3.5、 実験の必要に応じて、組織均質サンプルはまず総蛋白質濃度を測定することができる データ分析を容易にするために、BCA法を推奨します。一般的に、ELISA検出のために全タンパク質濃度を1〜3 mg／mlに調整する。肝臓、腎臓、膵臓などの組織サンプルには、内因性ペルオキシダーゼが高濃度に含まれているため、サンプル濃度が高い場合に発色基質と反応し、偽陽性が出ることがあります。1%H 2 O 2を用いて15 min不活性化して再検出することができる。

注： 溶解液の常用 使用する時、PH値はPH 7.3に調整する必要があり、NP-40、TritonX-100、DTTを含む成分の使用を避けると、キットの動作が深刻に抑制される。50 mM Tris+0.9%NaCL+0.1%SDS、PH 7.3を使用することをお勧めします。自分で調製するか、私たちに連絡して購入することができます。

4、 細胞培養上清は上清を収集し、 2−8°C、2500 rpmで5分間遠心分離し、清澄な細胞培養上清を収集した。すぐに検査に使用するか、1回の使用量で−80°Cに分注して冷凍保存しておく。

5、さいぼうぶんかいえき

5.1、 懸濁細胞の収集及び分解： 2−8°C、2500 rpmで5分間遠心分離し、細胞を収集した。さらに予冷したPBSを加えて軽く混和洗浄し、2-8°C、2500 rpmで5分間遠心分離し、細胞を収集した。0.5-1 mlの細胞分解液と適量のプロテアーゼ阻害剤（例えばPMSF、動作濃度1 mmol/L）を加え、氷の上に置き、30 min-1 hを分解するか、超音波に合わせて破砕する。

5.2、 壁貼り細胞の収集及び分解：上澄み液を吸引し、予冷した PBSは3回洗浄する。細胞分解液0.5-1 mlと適量のプロテアーゼ阻害剤（例えばPMSF、動作濃度1 mmol/L）を加え、細胞で壁細胞を軽く掻き落とす。細胞懸濁液を遠心管に移し、氷の上に置き、30 min−1 hを分解したり、超音波に合わせて破砕したりする。

5.3、 細胞分解過程中に銃口で遠心管を吹き付けたり断続的に揺動したりして、蛋白質を十分に分解させることができる 、粘稠状が出現するのはDNAであり、超音波破砕DNAを使用することができる。（或いは超音波3-5 mmプローブ、パワー150-300 W、氷上超音波でサンプルを処理し、1-2秒動作し、30秒停止し、3 ~ 5サイクル。)

5.4、 分解または超音波破砕が完了し、 2-8°C、10000 rpm遠心10 min、上清をEPチューブに移し、直ちに検査に使用するか、1回の使用量で-80°Cに分注して凍結保存する。

ラットアポトーシス誘導因子（AIF）ELISA検出キット

注：注意事項は組織サンプルと同じです。

注：参考までに！以上の情報が適切な選択に役立つことを願っています！