Neuro 2 a（N 2 a）マウス脳神経腫細胞

細胞紹介

クローン作成神経-2 Aは、R.J.Klebe和F.H.ルーデル経A.株マウスの自生腫瘍が確立した。

さいぼうとくせい

1）ソース：脳神経母細胞腫

2）フォーム：アメーバ様幹細胞

3）含有量：>1x10⁶ さいぼうすう

4）仕様：T25瓶または1mL凍結貯蔵管包装

5) 用途：科学研究用のみ。

輸送と保存：ドライアイス輸送細胞：（1）1mL凍結貯蔵管包装ドライアイス輸送、受領後-80冷蔵庫で一晩保存した後、液体窒素に転入したり、直接回復したりします。ドライアイスがきれいに揮発していることを発見したら、凍結貯蔵管のキャップが外れ、破損や細胞汚染がありますので、すぐに私たちと連絡。（2）T25瓶のよみがえる生存細胞常温出荷、受け取る到着後は細胞受容後の処理方法に従って操作する。

の処理：

1)細胞を受け取った後、75%アルコール消毒ボトル壁将T25ボトルの配置37℃培養箱の放置約2-3h培養瓶の破損、液の溢れ、細胞の汚染が発見された場合は、写真を撮ってすぐに連絡してください。

2)で4または5倍顕微鏡下で細胞の状態を確認し、同時に受け取ったばかりの細胞に写真を撮る（10×，20×）各2-3アフターサービス時に受け取った細胞の状態の根拠として、培養瓶の外観写真1枚を保存した。

3）壁貼り細胞：細胞は37℃培養箱への放置2-3h、顕微鏡下で細胞の成長と壁貼りの状況を観察し、一部の壁貼り細胞は宅配輸送中に振動で脱落し、脱落して塊になることがある。もし鏡の下で細胞の成長密度を観察するならば60%以下、培養瓶から灌液培地を除去することができる（壁に張り付いていない細胞が遠心回収を必要とする場合は、元培養瓶に再懸濁して打ち込む）,新規に調製した専用培地を加える6-8mL、細胞培養箱に入れて培養を続けた。細胞増殖密度が70%-80%以上、細胞を継代処理することができる。継代過程で輸送振動により脱落した細胞は遠心回収が必要である。

4）備考：輸送用の培地（灌液培地）は細胞の培養には使用できません。説明書の細胞培養条件に従って新たに調製された専用培地と交換して細胞を培養してください。 細胞を受け取った後の最初の継代提案T25培養瓶1：2継代

一.培地及び育てるとうけつちょぞう条件の準備：

1）準備メモリ培地良質子牛血清、10%；デュアルリアクタンス、1%。

2）培養条件：気相：空気、95%;二酸化炭素、5%。温度：37℃，培養箱の湿度は70%-80%。

3）とうけつえき：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二.細胞処理：

1）凍結保存細胞の回復：：

を含む1mL細胞懸濁液の凍結貯蔵管は37℃水浴中で急速に揺れて解凍し、含浸に加える4-6 mL専用培地の遠心管には均一に混合されている。に1000回転/分条件付き遠心分離3-5min、上澄み液を捨て、専用培地で細胞を再懸濁する。そして細胞懸濁液を添加して6-8 ml専用培地のフラスコ（または皿）中37℃で一晩培養した。翌日の顕微鏡下で細胞成長状況と細胞密度を観察した。

2）細胞継代：もし細胞密度ダ80%-90%，即ち継代培養。

壁貼り細胞の継代については、以下の方法を参照することができる：

1. 破棄カルシウムを含まない培養上清、マグネシウムイオンの公共放送サービス潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w/v）トリプシン-0.53 mM EDTAに培養瓶の中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），配置37℃培養箱ちゅうかいしょうか1-2分（難消化性細胞は消化時間を適切に延長することができる）ああ、そうだ後顕微鏡下で観察さいぼうしょうかもし細胞の大部分が丸くなるへんいはくり、速やかに操作台に戻し、タップ何度か培養瓶の後加入3-4ml含む10%子牛血清の培地から終止消化（しょうか）。

3.軽くなじませて吸い出す、1000回転/分条ピースダウン遠心分離3-5min、上澄み液を捨て、補充する1-2mL培養液の後に均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1：2のスケールを新規に分割T25ボトル、追加6-8ml説明書の要求に従って配置された新しい専用培地は細胞の成長活力を維持し、後続の継代は実際の状況に応じて1:2~1:5のスケールで進行。

3）細胞凍結保存:細胞を受け取ったら培養前に3代の間に細胞種子を凍結保存して、後続の実験に備える。下にT25瓶を例にとると、

1. 細胞凍結保存時従って細胞継代の過程で消化した細胞を遠心管に集め、血球計数板を用いて計数し、細胞の凍結保存密度を決定することができる。1×10⁶~1×10⁷個の生細胞/mアルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）.

2. 1000回転/分遠心3-5min、上清を除く。調製した細胞凍結貯留液を用いて細胞を再懸濁し、毎1ml凍結貯留液含1×10⁶~1×10⁷個の生細胞/ml凍結保存管に割り当てられた細胞を凍結保存管に割り当て、名前、代数、日付などの情報を表示します。

3. 凍結保存する細胞をプログラム冷却ボックスに入れ、-80同時に液体窒素容器内の凍結貯蔵管の位置を記録して、後続の調査と使用のために。

注意事項：

1. すべての動物細胞は潜在的な生物危害性があるとみなされ、二級生物安全台内で操作しなければならない。そして、すべての廃液とこの細胞に接触した容器は滅菌してから廃棄できるように注意してください。

2. 凍結保存細胞を回復する際には、保護手袋、衣類、保護マスクを着用することを推奨します。注意：凍結貯蔵管が液体窒素に浸漬すると漏れ、徐々に液体窒素が充満する。解凍時、液体窒素が気相に転化すると、容器が爆発したり、危険力で蓋を吹き飛ばしたりする可能性があり、舞い上がった屑が発生して人的被害を与える可能性がある。