マウスインターロイキン1β（IL-1β）ELISAキット

1.サンプルのタイプと収集：

血清：0.5-2時間または4℃夜を明かし、そして1000×グラム遠心20 分、上清を取ればいい、または上清を-20℃または-80℃保存しますが、繰り返し凍結融解しないようにしてください。
血漿：用いるエチレンジアミン四酢酸あるいはヘパリンを抗凝固剤として採取し、採取後の30分以内2-8℃ 1000×グラム遠心15分、上清を取れば検出でき、または上清を-20℃または-80℃保存しますが、繰り返し凍結融解しないようにしてください。

組織均質：予冷したPBS（0.01M，pH=7.4）組織を洗浄し、残留血液を除去し（均質スラリー中で分解した赤血球は測定結果に影響する）、秤量後に切断した組織と対応する体積の公共放送サービス（一般的には1:9の重量体積比、例えば1gの組織サンプル対応9mLの公共放送サービス具体的な体積は実験の必要に応じて適切に調整し、記録することができる。公共放送サービスにプロテアーゼ阻害剤を加える）をガラスホモジナイザーに加え、氷の上で十分に研磨した。最後に均質液を5000×グラム遠心5~10分、上澄みを取れば検査でき、または上清を-20℃または-80℃で保存するが、繰り返し凍結融解しないこと。

さいぼうぶんかいえき: 培養液を吸引・廃棄し、PBS（0.01 M、pH 7.4）細胞を一度洗浄した。細胞を細胞でスクレービングし、2-5 mL PBS（0.01 M、pH 7.4）を加えた。懸濁細胞は省略することができる。予備冷却PBSまたは非変性細胞溶解液（使用直前にプロテアーゼ阻害剤を添加）の適量の再懸濁細胞を添加すると、通常、6ウェルプレート1ウェルの細胞量は150〜250μL PBS再懸濁を必要とする。サンプルを-20℃または-80℃に入れて、サンプルを冷凍させて、更に室温でサンプルを解凍して、3回繰り返して凍結融解して、細胞を十分に分解させて、サンプルを超音波破砕して、分解の目的を達成することができます。4℃10000×gで10分間遠心分離し、細胞破片を除去し、上清を採取すれば検査でき、または上清を-20℃または-80℃で保存するが、繰り返し凍結融解しないこと。

細胞培養物上清または他の生物標本：どうぞ1000×グラム遠心20分、上清を取れば検出でき、または上清を-20℃または-80℃で保存するが、繰り返し凍結融解を避けるべきである。

2.サンプルの保存と安定性

2-8℃条件の下で、貯蔵することができます72h，に- 20℃または-80℃保管可能6ヶ月および以上。サンプルを収集した後、一回の検査が完了したのではなく、一回の使用量で分けて凍結保存して、繰り返し凍結融解しないようにしてください。

手順：

1. 2ウェル、陽性対照2ウェル、空白対照1ウェル（空白対照ウェルに試料及び酵素標識試薬を添加せず、残りの各工程の操作は同じである）。

2. 添加：それぞれ陰、陽性対照孔に陰性対照、陽性対照を添加する50μl。次に、測定対象サンプル孔にサンプル希釈液40μlを添加し、次に測定対象サンプル10μlを添加した。サンプリングしてサンプルを酵素スケールプレートの穴の底に加え、できるだけ穴の壁に触れないようにして、軽く揺れて混ぜます。

3. 温育：封板膜で板を封止後置37℃温育30分。

4. 配液：将30倍濃縮洗浄液を蒸留水で30倍希釈して予備用した。

5. 洗浄：封板膜を慎重にはがし、液体を捨てる、脱水30秒後に捨てて、このように5回繰り返して、撮って乾かします。

6. 酵素添加：酵素標的試薬を穴ごとに添加する50μl，空白穴を除く。

7. 37℃温育30分。

8. 洗浄：封板膜を慎重にはがし、液体を捨てる、脱水、各孔に洗浄液を満タンにし、静置30秒後に捨てて、このように5回繰り返して、撮って乾かします。

9. 発色：穴ごとに発色剤を先に入れるA50μアルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）、さらに発色剤を加えるB50μアルファベットl（英語アルファベットの12番目のアルファベット）、軽く振動して均一にして、37℃遮光発色10-20

10.終了：穴ごとに終了を加算えきたい50μl、反応を停止する（このとき青色立転黄色）。

11.450ナノ波長順に各孔のきゅうこう度（CD値）。測定は終止液を加えた後15分以内に行います。

注意：

1. 試薬準備：試薬キットを冷蔵環境から取り出し室温で平衡にする15～30分後に使用できます。

2. 添加：実験操作中に一回限りの滅菌吸引ヘッドを使用して、汚染を避けてください。サンプリング時に気泡の発生がないように注意し、サンプルを酵素スケールプレートの底部に加え、できるだけ穴の壁に触れず、軽く揺れて混合する。反応試薬の添加と同様に、添加過程における最初の孔と最後の孔の添加時間間隔はできるだけ小さい（一般的には10分以内）、大きすぎると、異なる「予温育」時間を招き、測定値の正確性と繰り返し性に明らかに影響を与える。測定値の正確性のために、複素孔を設置して実験することをお勧めします。

3. インキュベーション：試料の蒸発を防止するために、実験時に蓋または被膜を加えた酵素標識板を湿式箱に入れて、液体の蒸発を回避して、プレートを洗った後にできるだけ早く次のステップの操作を行うべきで、いかなる時も酵素標識板が乾燥状態にあることを避けて、同時に所定のインキュベーション時間と温度を厳格に守るべきである。

4. 洗濯：のうせんじょうえき可能性ことができるけっしょう析出、希釈時に水浴中で加温助溶可能十分に洗浄することは非常に重要であり、洗浄のたびに洗浄液*を乾燥させなければならない。洗浄中に反応孔内に残った洗浄液は吸水紙の上でたたいて乾かし、吸水紙を反応孔に直接入れて吸水しないようにするとともに、板底に残った液体と指印を軽く拭き取り、最後の酵素スケールの読み取りに影響を与えないようにしなければならない。自動洗濯機を使用する場合は、上手に使用してから本格的な実験に使用してください。

5. 反応時間の制御：基質を添加した後、反応孔の色変化を定期的に観察してください、もし色が濃いことが観察されたら、早めに終止液を添加して反応を停止して、反応が強すぎて酵素スケールの光密度示度に影響を与えないようにしてください。

6. 基質：基質は光を避けて保存し、貯蔵と温育時に強い光が直接照射されないようにしてください。