ヒト表皮成長因子（EGF）ELISAキット

ヒト表皮成長因子（EGF）ELISAキット

じっけんげんり
本キットは二重抗体サンドイッチ法を用いて標本中のヒト表皮成長因子（EGF）レベルを測定した。精製したヒト表皮成長因子（EGF）抗体を用いて微孔板に被覆し、固相抗体を作製し、単抗を被覆した微孔に表皮成長因子（EGF）を順次加え、HRP標識表皮成長因子（EGF）抗体と結合し、抗体−抗原−酵素標識抗体複合体を形成し、che底洗浄後に基質TMBを加えて発色させた。TMBはHRP酵素の触媒下で青色に変換され、酸の作用下で最終的な黄色に変換される。色の濃淡は試料中の表皮成長因子（EGF）と正の相関を示した。

サンプル要件
1.標本処理：（1）水サンプル採取後−20℃で3回凍結融解を繰り返し、ガラス繊維で濾過後、予備検査
（2）組織試料をブタノール：メタノール：水（5：25：70 V：V：V）で抽出するか、相別に抽出する
関連文献の抽出は行い、抽出後はできるだけ早く実験を行うべきである。すぐに試験を行うことができなければ、
標本を-20℃で保存でき、予備検査
2.NaN 3がワサビペルオキシダーゼ（HRP）活性を阻害するため、NaN 3含有試料を検出することはできない。

ヒト表皮成長因子（EGF）ELISAキット操作手順
1.試料添加：それぞれ標準穴、空白穴（空白対照穴に試料及び酵素標準試薬を添加せず、残りの各工程の操作は同じ）、
測定対象サンプルの穴。
次に、測定される試料10μl（試料の最終希釈度は5倍）を加えた。サンプルをサンプリングして酵素スケールプレートの穴の底に加え、
量は穴の壁に触れず、軽く揺らして混ぜます。
2.酵素添加：酵素標的試薬を穴ごとに50μl添加し、空白穴を除く。
3.温育：封板膜で封板した後、37℃で60分間温育した。
4.配液：30倍濃縮洗浄液を蒸留水で30倍希釈して予備用
5.洗浄：封板膜を慎重にはがし、液体を捨て、乾燥させ、穴ごとに洗浄液を満タンにし、30秒静置した後に廃棄する。
5回繰り返して、撮って乾かします。
6.発色：穴ごとに発色剤A 50μlを添加し、発色剤B 50μlを添加し、軽く振動混合し、37℃で光を避けて発色する
15分
2
7.終了：1ウェル当たり終止液50μlを添加し、反応を終了する（この時、青色は黄色に立転する）。
8.測定：空白孔をゼロに調整し、450 nm波長を順に各孔の吸光度（OD値）を測定する。測定は加算終了すべきである
液後15分以内に行う。

計算
標準物の濃度を横座標、OD値を縦座標とし、座標紙に標準曲線を描き、サンプルの
希釈倍数を乗算する、あるいは標準物の濃度とOD値を用いて基準を算出する
準曲線の直線回帰方程式、サンプルのOD値を方程式に代入し、サンプル濃度を計算し、希釈倍数を乗算し、
すなわちサンプルの実際の濃度である。

注意事項
1.試薬キットの冷蔵環境からの取り出しは室温平衡15-30分後に使用可能であり、酵素標準パッケージはプレート開封後に未
使い終わったら、板は密封袋に入れて保存しなければならない。
2.濃洗浄液は結晶析出する可能性があり、希釈時に水浴中で加温して溶解を助けることができ、洗浄時に結果に影響しない。
3.各ステップのサンプリングはサンプリング器を使用し、試験誤差を避けるために常に正確性を校正しなければならない。1回のサンプリング時間が最も良い

4.毎回測定しながら標準曲線を作ってください。復孔をしたほうがいいです。サンプル中の測定対象物質の含有量が高すぎる（サンプルOD値
標準品穴の第1穴のOD値より大きい）、まずサンプル希釈液で一定倍数（n倍）希釈してから測定してください、計
計算するときは最後に総希釈倍数（×n×5）を掛けてください。
5.基板封止フィルムは、交差汚染を避けるために使い捨てに限られている。
6.基質は光を避けて保存してください。
7.厳格に説明書の操作に従って行い、試験結果の判定は酵素標準器の示度を基準としなければならない。8.すべてのサンプル、洗浄液及び各種廃棄物は伝染物によって処理しなければならない。
9.本試薬の異なるロット番号成分は混合してはならない。

仕様：

保存条件及び有効期間
1.キット保存：、2-8℃。
2.有効期間：6ヶ月