ヒト歯髄幹細胞

製品属性：

組織由来：歯髄組織

製品規格：5×105 cells/T 25細胞培養ボトル

細胞の概要：

ヒト歯髄幹細胞自己滑膜組織を分離する、歯髄組織は歯内部の歯髄腔内にある。歯髄腔の外形は歯体の形態とほぼ似ており、歯冠部髄腔は大きく、髄室と呼ばれ、歯根部髄腔は小さく、根管と呼ばれ、根尖部には小さな孔があり、根尖孔と呼ばれている。歯髄組織は主に神経、血管、リンパと結合組織、そして歯髄の外周に配列された造歯本質細胞を含み、その作用は造歯本質である。歯髄は病源刺激物を受ける作用の違い及び生体抵抗力の違いにより、異なる病理変化が現れ、臨床上で一連の異なる症状と徴候として現れる。歯髄充血状況の持続時間が長い後、急性歯髄炎症に転化した。間葉性幹細胞（mesenchymal stem cells、MSCs）は胚胎時期の中胚葉組織に由来し、強い自己複製と多方向分化潜在力を持ち、脂肪細胞、骨芽細胞、軟骨細胞及び筋細胞などの多種の終末細胞への指向分化能力を持ち、MSCsを用いて軟骨損傷を修復することは良好な応用将来性があり、現在すでに骨髄、脂肪、滑膜、骨格、筋肉などの組織及び羊水、臍帯、臍帯血から間葉性幹細胞を分離し、製造することができる。

メソッドの概要：

会社の実験室で分離されたコラーゲン消化法、低密度希釈クローンを用いて製造され、細胞総量は約5×10？cells/瓶。

品質検査：

会社の実験室で分離されたCD 90免疫蛍光鑑定により、純度は90%以上に達することができ、しかもHIV-1、HBV、HCV、マイコプラズマ、細菌、酵母と真菌などを含まない。

育成情報：

培地：FBS、成長添加剤、Penicillin、Streptomycinなどを含む

液交換頻度：2-3日ごとに液交換

成長特性：壁貼り

細胞形態：線維芽細胞様

継代特性：3～5世代程度の継代が可能

消化液：0.25%

培養条件：気相：空気、95%、CO2，5%

細胞を冷凍保存する方法？

冷凍保存方法1：冷凍管を4℃30 ~ 60分→（-20℃30分*）→-80℃16 ~ 18時間（または一晩おき）→液体窒素槽vaporphaseに長期保存する。

冷凍保存方法2：冷凍管を設定したプログラム可能な降温機に置き、毎分1〜3℃から–80℃以下に下げ、更に液体窒素槽vapor phaseに入れて長期保存する。-20℃は1時間を超えてはならず、氷結晶が大きすぎて細胞が大量に死ぬのを防ぐために、このステップをスキップして-80℃の冷蔵庫に直接入れることもできますが、生存率は少し低下します。

培養操作：

1）蘇生細胞：1 mLの細胞懸濁液を含む凍結保存管を37℃の水浴中で急速に揺動解凍し、4 mL培地を加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で4分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mL培地を補充した後、均等に吹き付けた。翌日に液を交換し、細胞密度を検査した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

2.消化液1 ml（0.25%Trypsin-0.53 mM EDTA）を培養瓶に入れ、37℃培養箱に入れて1-2分間消化した後、顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、もし細胞の大部分が丸くなって脱落したら、速やかに操作台に戻し、培養瓶を数回軽くたたいた後、少量の培地を加えて消化を停止した。

3.6-8 ml/瓶で培地を補充し、軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で4分間遠心分離し、上澄み液を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。
4.細胞懸濁液を8 mlの培地を含む新しい皿または瓶に1：2の割合で分けた。

3）細胞凍結保存：細胞成長状態が良好な場合、細胞凍結保存を行うことができる。次のT 25本はクラスです。

1.細胞が凍結保存された場合、培地を廃棄した後、PBS洗浄後に1 mlを添加し、細胞が丸くなって脱落した後、1 mlの血清含有培地を添加して消化を停止し、血球計数板を用いて計数することができる。

2.4 min 1000 rpm遠心分離による上清の除去。1 mlの血清重懸濁細胞を加え、細胞数に応じて血清とDMSOを加え、軽く混合し、DMSO最終濃度は10%で、細胞密度は1 x 106/ml以上で、各凍結保存管は1 mlの細胞懸濁液を凍結保存し、凍結保存管に注意して標識をしっかりと行う。

3.凍結貯蔵管をプログラム冷却箱に入れ、−80度冷蔵庫に入れ、2時間後に液体窒素灌漑貯蔵に移す。次回取り出すために、チューブの凍結位置を記録します。

実験報告：

製品は科学研究用のみ：

一、分離と育成：

1、無菌条件下で、1-3 d齢SDラット心房組織を取り出し、その後PBSでこの組織塊を2回洗浄し、その後1 mm 3程度の大きさになる;

3、残りの組織はさらに3〜4 mLの酵素消化液を加え、10 s懸濁し、37℃で10分間消化した後、上述の方法で上澄みを収集し、消化を終了した後、4℃で放置し、このステップを2〜3回繰り返し、組織が消化されるまで、

4、200目ステンレススクリーンで細胞消化液を濾過し、1200 r/minで10 min遠心分離し、上清を捨て、沈殿細胞を10%FBS DMEM/F 12含有培地で混合懸濁し、25 cm 2培養瓶に接種し、37℃、5%CO 2培養箱に放置して培養する。

5、差速壁貼付1 h後、培地を吸引し、実験の必要に応じて6ウェルプレートに接種して培養を継続した。
二、免疫蛍光鑑定：
1、心房筋細胞の成長を80%融合まで待っている時、培地を捨て、培養したPBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4%パラホルムアルデヒドで室温条件下で細胞を15分間固定する、

2、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10分間、その後4℃の条件下で、0.1%TritonX-100で15分間膜を透過した、

3、PBSで細胞を2回洗浄し、毎回10 min、それから室温条件下で、4%BSAで細胞を30 min閉鎖する、

4、α-actin一抗を1：100の割合で希釈し、それを4℃の冷蔵庫に入れて細胞を一晩インキュベートする、

5、PBS細胞を3回洗浄し、毎回10 min、1：150の割合で抗α-actinの二抗を希釈し、37℃条件下で1時間放置する、

アンジオテンシンII抗体

アンジオテンシンII受容体1抗体

アンジオテンシン−1抗体

アンギオゲニン様蛋白2抗体

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