ヒト結腸直腸腺癌細胞シスボウ耐性株HCT 15/DP

細胞名：ヒト結腸直腸腺癌細胞シスボウ耐性株HCT15/DDP　

商品番号：WS155（（HCT15）STR鉴定）　　

仕様：1×10⁶cells/T 25培養ボトル

用途：科学研究用のみ

一、細胞紹介

この細胞はHCT 15細胞から構築されたDDP耐性薬物細胞株。

二、細胞特性

1）出所：直腸癌

2）形態：上皮細胞様、壁貼り成長

4）規格：T 25本または1 mL凍結保存管包装

5）用途：科学研究用のみ。

三、培地及び培養凍結保存条件の準備

1）詳細は説明書を参照。

血清を推奨します FBS500-WP-002

2）培養条件：気相：空気、95%、二酸化炭素、5%。温度：37℃、培養箱の湿度は70%〜80%である。

3）凍結保存液：90%血清、10%DMSO、現用現用配合。

四、さいぼうしょり

を含む1 mL細胞懸濁液の凍結貯留管を37℃水浴中で急速に揺動解凍し、4 ~ 6 mLの培地を含む遠心管に加えて均一に混合した。1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を廃棄し、培地重懸濁細胞次いで、細胞懸濁液を6〜8 mlの培地を含む培養瓶（または皿）に加え、37℃で一晩培養した。翌日の顕微鏡下で細胞成長状況と細胞密度を観察した。

2）細胞継代：細胞密度が80〜90%に達すると、継代培養を行うことができる。

壁貼り細胞の継代には以下の方法を参考にすることができる

1.培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

3.軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上清を捨て、1-2 mLの培養液を補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1:2の割合で新T 25瓶に分け、説明書の要求に従って配置された6-8 mlの新しい培地を添加して細胞の成長活力を維持し、その後の継代は実際の状況に基づいて1:2 ~ 1:5の割合で行った。

注意：細胞継代1 ~ 2回後も増殖を維持することができ、薬物濃度を0.5 ug/mLに高めて培養を続けることができる、この過程で細胞が増殖を停止し、状態が悪い場合は、細胞密度が約8×105個/mLになるまで薬物濃度を下げる（薬物濃度を半分下げる）か、薬物を含まない培地で培養する必要があり、成長状態が良い場合は必要な薬物濃度に切り替える。

3）細胞凍結保存：細胞を受け取った後、前3世代の培養時に細胞種子を凍結保存し、後続の実験に備えることを提案する。

以下T 25本を例に、

1.細胞凍結保存時に細胞継代の過程に従って消化した細胞を遠心管に収集し、血球計数板を用いて計数し、細胞の凍結保存密度を決定することができる。一般細胞の推奨凍結保存密度は1×106 ~ 1×107個の生細胞/mlであった。

1000 rpmで3-5 min遠心分離し、上清を除去した。調製した細胞凍結貯留液を用いて細胞を再懸濁し、1 mlの凍結貯留液当たり1×106 ~ 1×107個の生細胞/mlを1つの凍結貯留管に分配し、細胞を凍結貯留管に分配し、名称、代数、日付などの情報を表示した。

注意：細胞凍結保存中、薬物を添加してはならない。

2.凍結保存する細胞をプログラム冷却ボックスに入れ、−80度の冷蔵庫で一晩放置した後、液体窒素容器に移して保存した。同時に液体窒素容器内の凍結貯蔵管の位置を記録して、後続の調査と使用のために。