HBL−ヒトメラノーマ細胞

HBL−ヒトメラノーマ細胞

製品名：HBL−ヒトメラノーマ細胞

ブランド：上海研尊生物
納期：現品
細胞数：1 x 10 ^ 6 cells
細胞活力：95%（Viability by Trypan Blue Exclusion）
細胞継代：1：4〜1：6継代、週に2～3回液交換をする
成長条件：気相：空気、95%、二酸化炭素、5%温度：37℃
細胞検査：細胞はHIV-1、HBV、HCV、マイコプラズマ、細菌、酵母及び真菌を含まない
培養条件：DMEM（高糖類）+10%FBS+1%P/S、37℃，5% CO2
継代方法：1：2-1：3の2日に1回液体交換を提案する
凍結保存条件：無血清細胞凍結保存液
凍結保存条件：90%FBS+10%DMSO
細胞凍結保存：液体窒素凍結保存

細胞培養操作
ドライアイス輸送：細胞を受け取った後、直ちに液体窒素保存、または-80°C冷蔵庫で短期凍結保存、または直接蘇生する必要がある
常温輸送：細胞を受け取ったら、直ちに細胞培養瓶を包装箱から取り出し、下の操作手順に従って培養継代を行ってください
細胞継代：細胞密度は80%-90%に達し、継代培養を行うことができる
培養ボトル中の細胞操作手順
壁に貼り付けて培養した細胞については、送付前に培地を培養瓶全体に満たし、製品輸送中の壁に貼り付けた細胞の脱落を減らすことができます。
1.細胞を受け取ったら、汚染がないか注意して観察してください。培養瓶を倒置顕微鏡下に置いて濁り、細菌汚染の有無を注意深く検査した。輸送中に揺れがあり、温度変化にも敏感な細胞もあるため、一部の細胞が脱落して浮遊する場合があります。これらの細胞はまだ生きている細胞です。捨てないでください。遠心濃縮後に継代して使用することができます。
2.壁貼り細胞について、生物安全キャビネット環境において、真空ポンプを用いて培養瓶中の余分な培地を残り5-8 mL程度まで除去し、その後、培地に応じて適切なCO 2含有量の37℃恒温培養箱を選択して培養し、キャップを緩めた。細胞が培養瓶にいっぱい生えている場合は、すぐに継代してください。
3.懸濁した細胞について、生物安全キャビネット環境で、培養瓶の中の細胞を遠心管に移し、150 gを5分間遠心し、上清を除去した後、5 mL培地で細胞を吹き飛ばし、新しい培養瓶に移し、その後適切なCO 2含有量の37℃恒温培養箱に入れて培養した。
凍結保存管細胞操作工程
注意：細胞の高生存率を保証するために、製品を受け取ったら、すぐに解凍培養してください。
1.凍結貯蔵管を37℃の水浴中で揺動し、迅速に解凍する。汚染を避けるために、凍結貯蔵管の口が水面の上に置かれていることを確保する。解凍には迅速で、約1分かかります。
2.一旦凍結貯留管中の液体が溶けたら、すぐに取り出し、アルコールスプレーを用いて凍結貯留管表面を拭く。このステップから、後続の操作は生物安全キャビネットで行わなければならない。
3.凍結貯留管中の液体を5 mLの完培地を含む遠心管に移し、150 gを5分間遠心し、真空ポンプで上清を除去した。
4.培地を使用して細胞を再懸濁し、新しい培養瓶に移した。細胞回復の生存率を保証するために、培地を37℃の水浴予熱後に使用してください。
5.細胞を適切なCO 2を含む37℃の恒温培養箱に入れて培養した。
壁細胞継代培養
1.培養フラスコ中の培地を吸引し、廃棄し、PBSを加えて1回洗浄した。
2.1 mL 0.25（w/v）Trypsin−EDTA溶液を加え、細胞が壁から脱落して分離するまで37℃の培養箱に入れてインキュベートした。このプロセスには約3～5分かかります。
3.2 mLの完培地を加えてトリプシンを中和し、軽く吹きつけて細胞を培養瓶の表面から吹き落とし、細胞を分散させた。
4.細胞懸濁液を15 mL遠心管に集め、150 gを5分間遠心し、真空ポンプで上清を除去した。適量の培地を採取して細胞を再懸濁し、新しい培養瓶に移して培養した。
懸濁細胞の継代は以下の方法を参考にすることができる：
一、直接継代法
1.懸濁細胞が80%〜90%まで成長する（細胞懸濁液が黄色くなる）、すぐ継代できる、
2.細胞懸濁液1/2 ~ 1/3をストローで吸引廃棄する、
3.適量の新鮮な培地を加え、培養を続ける。
二、遠心継代法（細胞破片が発見された場合）
1.細胞懸濁液を遠心管内に移す、
2.150 gで5 min遠心分離し、上層清液を廃棄する。
3.新鮮な培地を用いた細胞の再懸濁、
4.ストローは適量の細胞懸濁液を吸収し、新しい培養瓶に入れ、適量の新鮮な培地を加え、培養を続ける。
細胞凍結保存操作
1.1000 rpm遠心分離5分で上清を除去した。血清重懸濁細胞を1 mL加え、細胞数に応じて血清とDMSOを加え、軽く混合し、DMSO最終濃度は10%で、細胞密度は1 x 106/mLを下回らず、各凍結保存管は1 mL細胞懸濁液を凍結保存し、凍結保存管に注意して標識をしっかりと行う。
凍結貯蔵管をプログラム冷却箱に入れ、-80°C冷蔵庫に入れ、少なくとも2時間後に液体窒素灌漑貯蔵に移す

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