ELISpot Pro：Human IL-4（ALP）ヒトIL-4検出

ELISpot Pro：Human IL-4（ALP）ヒトIL-4検出

MABTECH ELISPOTの実験原理

ELISPOT実験はPVDF膜を底とする96ウェルプレート（cat：MSIPS 4510、Millipore）を用いて、細胞から分泌されるサイトカインを捕捉するために特異的モノクローナル抗体（無毒、エンドトキシンを含まない、親和性の高い抗体が必要）を被覆した。

その後、培養プレートの孔に検査対象の細胞と抗原刺激物を加えて培養した。刺激物の刺激により、T細胞は対応する時間帯に対応するサイトカインを分泌する。このときサイトカインは膜に包まれた抗体に捕捉される。

細胞を洗浄した後、捕捉されたサイトカインはビオチン標識の第2抗体と結合することができ、それから酵素標識親和素でビオチンと結合し、化学酵素結合発色を行い、膜の局部に円形の斑点を形成することができる（もちろん、蛍光体標識の第2抗体を使用することもでき、これにより後続の化学発色方法を省き、一度に複数のサイトカインを検出することができる）、斑点ごとに当初のサイトカインを分泌していた細胞に対応する。

膜上の斑点の数を統計し、当初孔内に添加された細胞の総数で割ると、陽性細胞の割合を算出することができる。

MABTECHこのテクノロジーには、次の3つの利点があります。

一：感度が高い。100万個の細胞のうち1個の細胞分泌サイトカインがあれば検出でき、従来のELISA法に比べて2〜3桁上昇した。

二：単細胞レベル、生細胞機能検査。ELISPOTは抗原を用いて生細胞を直接刺激し、検出するのは生細胞の機能である。

3：操作が簡便で経済的で、高スループットスクリーニングを行うことができる。ELISPOTは複雑な細胞体外増幅過程がなく、同位体を使用せず、標準化された実験操作に基づいて、1人の実験者は同時に数百個のサンプルを処理することができ、効率は他の検査方法よりはるかに高い。

ELISpot Pro：Human IL-4（ALP）ヒトIL-4検出

MABTECH：3420-2 APW-2は以下を含む：

プレコート板、mAb IL 4-I（2枚の白色板）検査mAb：IL 4-II、ALP（150μl）

BCIP/NBT添加物（25 ml）

陽性対照：抗CD 3モノクローナル抗体（CD 3-2）（100μl）

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