ヒト小細胞胃癌細胞ECC 10

ヒト小細胞胃癌細胞ECC10

プロフィール：胃癌（小細胞癌）に由来するヒト細胞系。

品番：WS-S1438

仕様：1×10ラテックス細胞/T 25培養瓶

一、細胞基本情報

-細胞形態：リンパ母細胞様、懸濁成長

-細胞含有量：＞1×10ラテックス細胞/瓶

-包装規格：T 25培養瓶/1 mL凍結保存管

-製品用途：科学研究用のみ、動物や人間の病気の治療製品として使用することはできません。

二、培地と培養条件

1.培地

RPMI 1640培地、10%ウシ胎児血清、

推奨血清：WinSera FBS500-WP-002

2.培養条件

−気相：95%空気＋5%COタンパ温度：37℃、培養箱の湿度：70～80%

3.凍結保存と貯蔵

−凍結保存液：90%ウシ胎児血清＋10%DMSO（現配合）

三、輸送形式と受入処理

1.常温出荷（T 25本の生細胞）

細胞を受け取ったら、まず T 25培養ボトル本体の表面消毒、培養瓶を培養箱に入れて2〜3時間静置する、細胞密度と成長状態を観察し、2 ~ 3枚の鮮明な写真を撮影して販売にフィードバックする、細胞密度が基準を達成すれば継代を行うことができ、前期継代比は1：2であることが提案されている。細胞が再び満杯になったら、1本の細胞全体を1本の1 mL凍結保存管に凍結保存し、もう1本は継代を続けた。2〜3本の種子細胞を繰り返し凍結保存した後、増幅実験を行い、突発的な状況による細胞の断種を避けることを提案した。

細胞後継代の推奨を受ける T 25培養瓶を1：2に継代した。

2.ドライアイス出荷（凍結保存管細胞）

一般的な出荷は 2本の凍結保存管、1本の回復、1本の予備保存を提案する、もし支回復に失敗したら、メーカー基準の回復プロセスに厳格に従って第2支を操作する。2本とも回復に失敗した場合は、回復の全過程の写真をすぐに保存し、販売処理に通知してください。

四、細胞培養工程

1.凍結保存細胞の回復

−4−6 mLの培地を含む遠心管に加えて軽く混ぜ、

−1000 RPM 3−5分間遠心分離し、上澄み液を廃棄する、

−培地を用いて細胞を再懸濁し、6−8 mLの培地を含む培養瓶/皿に播種し、

−37℃で一晩培養し、翌日顕微鏡下で細胞成長状態と密度を観察した。

2.壁貼り細胞の継代については、（細胞密度80%〜90%継代可能）

−培養上清を廃棄し、カルシウム、マグネシウムイオンを含まないPBSで細胞を1〜2回潤洗した。

−0.25%（w/v）yiプロテアーゼ−0.53 mM EDTAを培養瓶（T 25瓶1−2 mL、T 75瓶2−3 mL）に添加し、37℃培養箱に置いて1−2分間消化し（消化しにくい細胞は適切に消化時間を延長することができる）、その後顕微鏡下で細胞消化状況を観察し、細胞の大部分が丸くなり脱落すると、速やかに操作台に持ち帰り、培養瓶を数回軽くたたいた後、3−4 mlの10%FBS含有培地を添加して消化を中止する。

-軽く均等にしてから吸引し、1000 RPM条件下で3-5 min遠心分離し、上澄み液を捨て、培養液1-2 mLを補充してから均等に吹き付ける。細胞懸濁液を1：2の割合で新しいT 25瓶に分け、6−8 mlの明細書の要求に従って配置された新しい培地を添加して細胞の成長活力を維持し、その後の継代は実際の状況に基づいて1：2−1：5の割合で行った。

3.懸濁細胞の場合、継代は以下の方法を参考することができる：

−方法1：細胞を収集し、1000 RPM条件下で4分間遠心分離し、上清を捨て、培養液1−2 mLを補充した後、均等に吹き、細胞懸濁液を1：2〜1：5の割合で8 ml培地を含む新しい皿または瓶に分けた。

方法2：半数の液交換方法を選択し、半数の培地を捨てた後、残りの細胞を懸濁し、細胞懸濁液を1：2〜1：3の割合で新しい8 ml培地を含む新しい皿または瓶に分けることができる。

4.細胞凍結保存：細胞を受け取った後、培養前3世代の時に細胞種子を凍結保存して、後続の実験使用に備えることを提案する。

五、生物安全上の注意事項

1.すべての動物細胞は潜在的な生物危害性があると見なし、er級生物安全キャビネット内で操作し、個人防護をしっかり行わなければならない、すべての廃液及び細胞に接触した容器は、滅菌処理を経てから廃棄することができる。

2.凍結保存細胞を回復する時、必ず保護手袋、保護fu及び防止huマスクを着用しなければならない。凍結貯留管が液体窒素に浸漬すると漏れが発生し、液体窒素を流し込む可能性があり、解凍時の液体窒素の気化は容器の破裂、キャップの崩壊による傷などの傷害を招きやすく、操作時は慎重に行わなければならない。