はじめに

烏頭、附子中の烏頭塩基、馬銭子中の士の寧、馬銭子塩基はいずれも猛毒アルカロイドであり、微量で深刻な中毒や死亡を招くことができる。2020年版の「中国薬典」には、依然として60近くの漢方薬および漢方薬の品種に烏頭塩基、士の寧を使用した対照品があり、厳格に管理制御された猛毒物質として、公安部は対応する対照品を配布しないことを要求している[1]。薬局方基準の科学性、合理性と適用性を確保するために、烏頭塩基、士の寧の対照品の代わりに烏頭ジエステル型アルカロイド、馬銭総アルカロイドの対照抽出物を用いる必要がある。2016年には、中国食品医薬品検定研究院が関連研究を開始した[2]、このほど、国家薬局方委員会は57の関連品種の増改訂を完了し、2025年版「中国薬局方」に収録された[1]。

ウラジエステル型アルカロイド

烏頭ジエステル型アルカロイド（烏頭塩基、次亜烏頭塩基、新烏頭塩基など、猛毒）を製造（浸漬、蒸煮、サンドパーマなど）した後、C-8位アセチル基が加水分解して烏頭モノエステル型アルカロイド（ベンゾイル烏頭塩基、ベンゾイルネオ烏頭塩基、ベンゾイル次烏頭塩基など、低毒）を生成し、C-14位ベンゾイル基はさらに加水分解して烏頭アルコールアミン型アルカロイド（例えば、烏頭原塩基、新烏頭原塩基、次亜烏頭原塩基など、微毒）を生成する[4]を参照してください。

川烏（製川烏）、草烏（製草烏）と附子に含まれる烏頭ジエステル型アルカロイドは主に烏頭塩基、次烏頭塩基、新烏頭塩基などであり、黄草烏（製黄草烏）に含まれる烏頭ジエステル型アルカロイドは主に雲南烏頭塩基、草烏甲素などである[5]現在市販されている烏頭ジエステル型アルカロイド対照抽出物の含有量は新烏頭塩基、次烏頭塩基、烏頭塩基の3種類を基準とし、しかも一部の漢方薬品種における烏頭ジエステル型アルカロイドの測定は、サンプル基質の妨害が比較的に深刻である。サイマー飛実験室は5種類の烏頭ジエステル型アルカロイドと3烏頭モノエステル型アルカロイドを含む新しい方法を確立し、製薬企業が関連製剤の品質をより全面的に制御するのを容易にした。

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図1 8種の烏頭アルカリ構造式

生パッチ特徴図面サイマー飛完全応用ソリューション

01

対照品溶液及び供試品溶液の調製

8種類の烏頭アルカリ対照品溶液はすべて標準品供給商から購入し、2ロットの江油生附属錠供給試料溶液はすべて顧客から提供した。

対照品溶液の調製：ベンゾイルネオヘドリン対照品、ベンゾイルウヘドリン対照品、ベンゾイルネオヘドリン対照品、ネオヘドリン対照品、ウヘドリン対照品、ネオヘドリン対照品、ネオヘドリン対照品、粗茎ウヘドリン対照品溶液の適量をとり、精密に秤量し、アセトニトリルを加えて1 mL当たり各10μgの混合溶液を調製すれば、得られる。

供試品溶液の調製：本品の粉末約1.0 gをとり、精密に秤量し、25 mLのプラグガラス試験管に入れ、イソプロパノール−酢酸エチル（1：1）混合溶液10 mL（アンモニア含有試験液0.6 mL）、プラグ、氷水浴超音波を正確に加えて30 min抽出し、室温で静置沈降した。5 mLの上清液を15 mLの遠心管に移し、8000 rpm 20℃で5分間遠心し、4.00 mLを正確にクリーン窒素吹管に入れ、30℃の水浴窒素を近乾に吹き、2.00 mLのアセトニトリル再溶解（渦/超音波/渦）、5000 rpm 20℃で3分間遠心し、再溶液は0.2μm親水性PTFE濾膜（P/N：42213-NPL）を通過し、濾液は機械試験を待つ。

測定法：対照品溶液と供試品溶液をそれぞれ5μL精密に吸引し、液体クロマトグラフィーに注入し、測定し、即ち得た。

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02

計器配置及びクロマトグラフィー条件

Thermo Scientific™ Vanquish Core™ 高効率液体クロマトグラフィーシステム、構成：ポンプQuaternary Pump C（VC-P 20-A）、自動サンプラSplit Sampler CT（VC-A 12-A）、カラム温度箱Column Compartment C（VC-C 10-A）、検出器Diode Array Detector CG（VC-D 11-A）、データ処理Chromeleon™ 7.3

色谱柱：Acclaim ミックスモード WCX-1, 3 μm, 3.0×150 mm (P/N: 070092)

移動相：A：超純水B：100 mM（NH4（H）2PO4（リン酸pHを3.0に調整）C：アセトニトリル

流速：0.5 mL/min

勾配溶出プログラム：詳細は添付ファイル応用ソリューションを参照

注入量：5µL

カラム温度：40℃

検出器：DAD、収集波長：230/260 nm、収集周波数：5 Hz、スペクトル収集：190-400 nm

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03

スペクトル及びデータ

3.1

対照品溶液スペクトル

図2 8種類の烏頭塩基混合対照品溶液分離スペクトル及びデータ（10.0μg/mL）（クリックして大図を見る）

図3 8種類の烏頭塩基単一対照品溶液定位スペクトル（10.0μg/mL）（クリックして大図を見る）

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供試品溶液中の8種類の烏頭塩基はいずれも有効な分離を実現でき、そのうち5種類の烏頭ジエステル型アルカロイドはピーク形状が良好で、カラム効果が優れ、正確な確定性と定量ができる、3種類の烏頭モノエステル型アルカロイド中のベンゾイル烏頭原塩基とベンゾイル次烏頭原塩基はベースライン分離に失敗し、予備定性分析に用いることができる。

3.2

供試品溶液スペクトル

図4生パッチ供試品溶液分離スペクトル及びデータ（S 1）

（クリックしてグラフを見る）

図5生パッチ供試品溶液分離スペクトル及びデータ（S 2）

（クリックしてグラフを見る）

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2回の副産物からは烏頭塩基、次烏頭塩基、新烏頭塩基が検出され、目標ピークはすべて基線分離と正確な定性的定量を実現することができ、一方、雲南烏頭塩基と草烏甲素は検出されなかった。

3.3

生パッチ特徴図譜

図6生パッチ供試品溶液中のネオヘドリン隣接ピークのスペクトル図

（クリックしてグラフを見る）

230 nmでは、生附属錠供試品溶液中の新烏頭塩基の目標ピークを前後に分けて2つの未知ピークを出すことができ、スペクトル図によって識別し、他のタイプの烏頭ジエステル型アルカロイドと疑い、その後、相応の研究を展開することができる。

図7 6種類の烏頭アルカリ対照品溶液と生附属錠供試品溶液の重畳スペクトル（クリックして大図を見る）

生パッチ供試品溶液の連続注入重畳スペクトルにおいて、各目標ピークの保持時間とピーク面積は安定であり、RSDはいずれも1%未満であり、方法の再現性と安定性は優れており、生パッチ中の烏頭ジエステル型アルカロイド特徴スペクトルの構築に用いることができる。

04

結果と議論

1)本試験はAcclaim Mixed-Mode WCX-1混合モードクロマトグラフィーカラム（逆相＋弱陽イオン交換）とイオンを含まない試薬またはテトラヒドロフランの流動相を用い、Vanquish Core高効率液体クロマトグラフィーシステムを配合し、8種類の烏頭塩基を効果的に分離でき、そのうち5種類の烏頭ジエステル型生物塩基はピーク形状が良好で、カラム効果が優れ、正確な確定性と定量性ができ、3種類の烏頭モノエステル型アルカロイドは初歩的な定性分析に用いることができる。

2)供試品溶液中の5種類の烏頭ジエステル型アルカロイドの分離に対してクロマトグラフィー条件の最適化を行い、新烏頭塩基ピークの前後に2つの未知ピークを分け、スペクトル図を通じて他の烏頭ジエステル型アルカロイドと疑われることを識別したが、雲南烏頭塩基と草烏甲素はいずれも検出されなかった。

3)本方法は生附子加工の製造過程における烏頭アルカリ加水分解程度のモニタリングに適用するだけでなく、川附子と雲南附子道地薬材の産地追跡にも使用することができる。

5.参考文献

[1]李浩、申明叡、張鵬、等.2025年版『中国薬典』の主な増補改訂内容の紹介[J].中国薬品標準、2025、26（01）：17-22.DOI：10.1978/j.chp.2025.01.003.

[2]朱月、王瑞忠、張聿梅、など。ジエステル型烏頭アルカロイド対照抽出物の調製及びその応用研究[J].中国薬品標準、2016、17（04）：252-257.DOI：10.19778/j.chp.2016.04.003.

(3)王菲菲、呉寿海、張聿梅、など。馬銭子対照抽出物の研究及び馬銭子薬材及び複方製剤の品質管理における応用[J].薬物分析雑誌、2018,38（07）：1226-1230.DOI：10.6155/j.0254-17932018.07.18.

[4]胡家豪、李文儒、時慶欣、等.附子化学成分と製造プロセスの研究進展[J].中国漢方薬雑誌、2025、50（06）：1458-1470.DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20241214.201.

(五)徐怡、秦波、曹紅雲、など。HPLC法は同時に黄草烏中の雲南烏塩基と草烏甲素の含有量を測定した[J]。雲南漢方薬雑誌、2017、38（09）：70-72.DOI：10.16254/j.cnki.53-1120/r.2017.09.033。

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